纹状体区AMPA受体转运和自噬性降解在可卡因所致大鼠成瘾行为中的作用及机制

发布时间：2018-04-03 14:00

  本文选题：可卡因　切入点：行为敏化　出处：《华中科技大学》2015年博士论文

【摘要】：第一部分伏隔核区AMPA受体转运对可卡因所致大鼠行为敏化的影响及机制 目的：大量的研究证明可卡因引起的行为敏化与谷氨酸传递高度相关,反复给予可卡因再戒断增加伏隔核(nucleus accumbens, NAc)区突触膜上的α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异VA唑丙酸受体(a-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid receptors, AMPARs)水平,但AMPARs与行为敏化之间的关系仍不清楚。N-乙烷马来酰亚胺敏感因子(N-ethylmaleimide-sensitive factor, NSF)与α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异VA唑丙酸受体亚单位2(AMPA receptor subunit2, GluA2)间的相互作用被认为在维持AMPARs受体的突触传递中非常重要,但NSF与GluA2间的相互作用在可卡因所致大鼠行为敏化中的研究鲜有报道。本研究旨在探讨NSF与GluA2的相互作用与可卡因行为敏化的关系,进一步阐明可卡因行为敏化的病理机制。 方法：采用自发活动实验评价大鼠的行为敏化、BS3交联检测AMPA受体的膜表达、免疫共沉淀检测NSF与GluA2之间的结合力、免疫荧光检测NSF与GluA2之间的共定位。 结果：给予大鼠慢性腹腔注射可卡因建立行为敏化动物模型。免疫荧光实验发现GluA2和NSF蛋白的共定位增加,免疫共沉淀实验发现GluA2和NSF的结合增加(sal:100.00±16.82; coc:155.38±19.74; n=4; p0.05vssal)。在可卡因强化之前伏隔核区注射干扰GluA2和NSF结合的多肽TAT-pep-R845A可增强大鼠对可卡因的敏化行为(aCSF+coc:23526.25±2002.80; TAT-pep+coc:22567.27±1900.80; TAT-pep-R845A+coc:30283.93±987.41; n=6-12rats; p0.01vs other experimental groups)。BS3交联法发现TAT-pep-R845A孵育行为敏化大鼠脑片可抑制GluA2的膜表达(TAT-pep:100.00±6.04:TAT:pep-R845A:54.80±6.80；n.5；p0.05vs control peptide).伏隔核区定位注射TAT-pep-R845A亦可抑制GluA2的膜表达(TAT-pep:100.00±9.40；TAT-pep-R845A:68.75±12.10； n=5rats:p0.05vs control peptide). 结论：GluA2和NSF结合增强促进GluA2的膜表达是机体对可卡因的一种抵抗,干预两者间的结合可增强大鼠对可卡因的敏化行为,其机制可能是通过抑制GluA2的膜表达。 第二部分背侧纹状体区AMPAK受体降解对可卡因所致大鼠摄药行为的影响及机制 目的：药物成瘾是长期慢性使用成瘾性药物而引起的强迫性觅药行为。背侧纹状体是调节强迫性摄药行为的主要脑区。以往的研究多关注NAc区的谷氨酸投射与可卡因觅药行为的关系。而习惯性的摄药行为与背侧纹状体区的动机环路更加密切。因此本研究探讨背侧纹状体区域AMPAR在可卡因强迫性摄药行为中的作用及机制。 方法：可卡因自身给药检测动物的摄药行为；实时定量pCR检测GluAl,2,3的mRNA水平；免疫印迹检测相关蛋白的表达；脑区注射病毒或者药物；免疫荧光检测相关病毒表达情况和蛋白表达情况。 结果：可卡因自身给药训练后大鼠背侧纹状体区域GluAl的表达出现下调(saline:100.00±5.69%；cocaine:60.00±2.07%;n=8；p0.01vs saline).而过表达GluAl增加大鼠对可卡因的摄入(n=8-9rats；p0.05,p0.01vs the sameday in lenti-control rats).同时研究发现,可卡因自身给药训练增加大鼠背侧纹状体区域自噬标志物LC3II蛋白表达(saline:100.00±17.17%;cocaine limited:169.44±25.17%；cocaine prolonged:165.85±20.28%；n=4-10rats；p0.05,p0.01vs saline),降低自噬底物蛋白62(protein62,p62)的表达(saline:100.00±5.35%；cocaine:35.23±3.30%;n=4-10rats p0.05,p0.01vs saline)。 结论：可卡因自身给药引起的大鼠背侧纹状体区域GluAl的表达下调。
[Abstract]:The effect and mechanism of AMPA receptor transport in the nucleus accumbens on cocaine induced behavioral sensitization in the first part of the nucleus accumbens
Objective: it has been proven that cocaine induced behavioral sensitization and glutamate transmission are highly correlated, repeated cocaine withdrawal and an increase in the nucleus accumbens (nucleus accumbens, NAc) on the membrane of synaptic alpha amino -3- hydroxy -5- methyl -4- ISO VA acid receptor (a-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid receptors, AMPARs) level, but the relationship between AMPARs and behavioral sensitization remains unclear.N- ethane maleimide sensitive factor (N-ethylmaleimide-sensitive factor, NSF -3-) and alpha amino hydroxy -5- methyl -4- ISO VA acid receptor subunit 2 (AMPA receptor, subunit2, GluA2) interactions are considered in the maintenance of AMPARs receptors in synaptic transmission is very important, but the interaction of NSF between GluA2 and little research in behavior of cocaine induced sensitization in the rat in the report. This study aims to investigate the interaction between NSF and GluA2. The relationship with cocaine behavioral sensitization further clarifies the pathological mechanism of cocaine behavioral sensitization.
Methods: spontaneous activity test was used to evaluate behavioral sensitization in rats. BS3 cross-linking was used to detect the expression of AMPA receptor, and the binding force between NSF and GluA2 was detected by immunoprecipitation. The co localization between NSF and GluA2 was detected by immunofluorescence.
Results: the rats were given intraperitoneal injection to establish chronic cocaine sensitization animal model. Immunofluorescence test showed that GluA2 and NSF protein co localization increases, it is found that increasing the combination of GluA2 and NSF co immunoprecipitation (sal:100.00 + 16.82 + 19.74; coc:155.38; n=4; p0.05vssal). In cocaine reinforcement before V polypeptide TAT-pep-R845A septum injection region the combination of NSF and GluA2 interference can enhance sensitized rat behavior for cocaine (aCSF+coc:23526.25 + TAT-pep+coc:22567.27 + 2002.80; 1900.80 + 987.41; TAT-pep-R845A+coc:30283.93; n= 6-12rats; p0.01vs other experimental groups.BS3) cross-linking method that the expression of TAT-pep-R845A were incubated with behavioral sensitization in rat brain slices inhibited GluA2 membrane (TAT-pep:100.00 + 6.04:TAT:pep-R845A:54.80 + 6.80; N.5; p0.05vs control peptide). The nucleus accumbens injection of TAT-pep-R845A also can inhibit the GluA2 film Expression (TAT-pep:100.00 + 9.40; TAT-pep-R845A:68.75 + 12.10; n=5rats:p0.05vs control peptide).
Conclusion: the combination of GluA2 and NSF enhances the expression of GluA2, which is a resistance of the body to cocaine. Intervening the combination between them can enhance the sensitization behavior of cocaine in rats. The mechanism may be by inhibiting the expression of GluA2 membrane.
The effect and mechanism of AMPAK receptor degradation in the second part of the dorsal striatum on the behavior of rats induced by cocaine
Objective: drug addiction is a chronic compulsive use of addictive drugs caused by drug seeking behavior. The dorsal striatum is regulated compulsive main brain areas taken delivery behavior. Previous studies pay more attention to the relationship between glutamate projection and NAc region of the cocaine drug seeking behavior. The behavior and drug uptake in dorsal striatum area of habitual the motivation of the loop more closely. This study of dorsal striatum region AMPAR effect and mechanism of forced drug behavior in cocaine intake.
Methods: cocaine self medication was used to detect the drug taking behavior of animals, real-time quantitative pCR was used to detect the mRNA level of GluAl and 2,3, the expression of related proteins was detected by Western blotting, virus or drugs were injected into the brain area, and the expression and expression of virus related virus were detected by immunofluorescence.
Results: the expression of cocaine to the dorsal striatum of rats GluAl drug after training down (saline:100.00 + 5.69% + 2.07%; cocaine:60.00; n=8; p0.01vs saline). And the expression of GluAl increased intake of cocaine in rats (n=8-9rats; P0.05, p0.01vs the sameday in lenti-control rats). At the same time, the study found that cocaine itself administration training increased in rat dorsal striatum region of autophagy marker LC3II expression protein (saline:100.00 + 17.17% cocaine + 25.17% cocaine; limited:169.44; prolonged:165.85 + 20.28%; n=4-10rats; P0.05, p0.01vs, saline) reduced autophagy substrate protein 62 (protein62, p62) expression (saline:100.00 + 5.35% cocaine:35.23 + 3.30% n=4-10rats; P0.05, p0.01vs; saline).
Conclusion: the expression of GluAl in the dorsal striatum region of rats induced by cocaine administration is down regulated.

【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 刘宝松,陈恒胜,许忠,陈力学,曾琳,龙在云;缺氧所致神经元AMPA受体的结构组成及功能变化[J];第三军医大学学报;2004年23期

2 谭晓冬,许尚臣,孙若鹏;AMPA受体与缺血性脑损伤[J];国外医学脑血管疾病分册;2002年02期

3 刘宝松,陈恒胜,许忠,陈力学,曾琳,龙在云;缺血损伤对神经元膜表面AMPA受体构成变化的影响(英文)[J];中国临床康复;2004年31期

4 王昌鹏;阴正勤;秦伟;翁传煌;;大鼠视觉发育可塑性关键期终止前后视皮层AMPA受体电流的发育变化[J];眼科新进展;2008年09期

5 王丽雁,赵聪敏,张雨平;AMPA受体拮抗剂对新生鼠缺氧缺血性脑损伤自由基的影响[J];中国临床康复;2004年13期

6 王丽雁;赵聪敏;张雨平;温恩懿;;AMPA受体拮抗剂对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用[J];第三军医大学学报;2006年17期

7 胡巧;罗媛媛;陈恒胜;程莉;蒋莉;;脑源性神经营养因子与不含GLuR2的AMPA受体在增强AMPA受体功能及活化突触囊泡中的关系[J];重庆医科大学学报;2014年02期

8 岳广欣;王竹风;张巧丽;赵歆;岳利峰;丁杰;陈家旭;;AMPA受体和相关蛋白在束缚应激大鼠相关脑区的表达变化及逍遥散对其影响[J];中国应用生理学杂志;2008年02期

9 鲁涛,杨雄里;AMPA受体失敏和快速兴奋性突触传递[J];生理科学进展;1997年03期

10 罗一峰,苗芸,钱海蓉;新型AMPA受体拮抗剂PD152247在大鼠短暂性局灶性脑缺血中的神经保护作用[J];国外医学(脑血管疾病分册);2000年03期

相关会议论文 前8条

1 刘宝松;陈力学;曾琳;龙在云;;缺氧损伤后突触后膜AMPA受体的结构与功能变化研究[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年

2 陈家旭;岳广欣;;慢性束缚应激大鼠中枢AMPA受体及相关蛋白变化与肝主疏泄的关系[A];第八届全国中西医结合实验医学研讨会论文汇编[C];2006年

3 陈文新;Inglis F.M．;;AMPA受体与大鼠脑皮质神经元可塑性关系的探讨[A];首届全国分子核医学暨分子影像学学术交流会资料汇编[C];2006年

4 臧大维;刘娟;Chen F;Cheema SS;;白血病抑制因子降低AMPA受体在肌萎缩侧索硬化转基因G93AG1H小鼠脑干及感觉运动皮质的表达[A];第九次全国神经病学学术大会论文汇编[C];2006年

5 石晶;姚裕家;李晋辉;李德渊;;AMPA受体亚单位GluR2和钙离子在PVL发病机制中的作用探讨[A];中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编[C];2006年

6 邵欣;朱丽君;黄文海;王毓斌;朱佳;沈颖;夏军;罗建红;;PICK1 T82潜在的磷酸化减弱与GluR2的相互作用并调节AMPA受体的转运[A];Proceedings of the 8th Biennial Conference of the Chinese Society for Neuroscience[C];2009年

7 许民辉;易良;周椿;沈光建;徐伦山;;海马神经元损伤后PTEN表达水平与AMPA受体亚基表达定位变化的研究[A];第二届西部神经外科学术会议论文集[C];2010年

8 郭盛珍;师咏勇;赵欣之;段世伟;周坚;孟俊伟;杨异凤;顾牛范;冯国鄞;刘慧君;朱邵敏;贺林;;在中国人群中AMPA受体亚基GluR4基因(GRIA4)与精神分裂症不存在关联[A];中国神经科学学会精神神经专业委员会成立大会暨第一届学术会议论文集[C];2004年

相关博士学位论文 前6条

1 陆海锋;纹状体区AMPA受体转运和自噬性降解在可卡因所致大鼠成瘾行为中的作用及机制[D];华中科技大学;2015年

2 李艳春;AMPA受体酪氨酸磷酸化修饰在机体低氧反应中作用的研究[D];山东大学;2006年

3 李巍;谷氨酸受体相互作用蛋白介导AMPA受体兴奋性毒性效应[D];第四军医大学;2009年

4 封敏;针刺对AD模型小鼠海马神经元突触可塑性的影响及AMPA受体机制研究[D];成都中医药大学;2012年

5 范於菟;AMPA受体调节剂的设计、合成及抗疲劳活性研究[D];西北工业大学;2014年

6 张丽;BZD类和THIQ类非竞争性AMPA受体拮抗剂的合成及修饰[D];天津大学;2007年

相关硕士学位论文 前2条

1 刘燕妮;外周组织损伤对脊髓背角AMPA受体突触表达的动态调控机制[D];兰州大学;2013年

2 陈经纬;Zn~(2+)对水平细胞Kir通道和AMPA受体调控作用建模[D];上海交通大学;2013年

，

本文编号：1705495