透明质酸寡糖促进糖尿病大鼠伤口愈合的研究
本文选题：透明质酸寡糖 + 糖尿病伤口愈合 ； 参考：《锦州医科大学》2017年硕士论文
【摘要】：目的1、探讨透明质酸寡糖对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及血管形成的影响。2、研究透明质酸寡糖对糖尿病大鼠伤口愈合面积、伤口周围血流供应情况及血管新生的作用。3、探讨透明质酸寡糖对糖尿病大鼠伤口愈合的机制。方法建立实验性糖尿病体内与体外模型,研究透明质酸寡糖(Hyaluronic acid oligosaccharide,o-HA)对在体糖尿病大鼠伤口愈合的作用。葡萄糖(33 mmol/L)诱导人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)模拟糖尿病体外模型,通过MTT、划痕及小管形成实验,检测o-HA在10μg/m L浓度条件下对高糖环境下的HUVEC增殖、迁移及小管形成的影响。采用乳化法制备o-HA软膏并将其应用于糖尿病大鼠伤口模型上,行拍照、记录、观察伤口创面大小及炎症情况;HE染色检测上皮化程度、肉芽组织和成纤维细胞再生情况;激光多普勒血流仪观察伤口周围血流供应情况;CD31免疫组化染色检测伤口血管新生情况,并通过检测伤口组织中p-Src、p-ERK和TGF-beta1蛋白的表达情况,进一步研究o-HA通过促进内皮细胞增殖、迁移和血管新生等活动促进糖尿病大鼠伤口愈合。结果1、MTT实验结果显示:o-HA组细胞增殖数量较PBS组增多(P0.05);迁移实验结果显示:o-HA组划痕缩小面积较PBS组明显增多(P0.01),其划痕面积缩小率约为58%;小管形成实验结果显示:o-HA组管腔形成数量较PBS组增多,且具有统计学差异(P0.05)。2、成功制备透明质酸寡糖软膏并将其局部应用于糖尿病大鼠伤口模型上。3、HE染色和拍照记录观察结果分别从组织学和形态学两个角度表明给予透明质酸寡糖软膏组大鼠的伤口愈合情况明显较基质组伤口愈合的快且面积小。7 d时,两组伤口愈合面积就有明显的差异(P0.05);成纤维细胞、肉芽组织再生和上皮化程度较基质组明显增多,差异具有统计学差异(P0.01)。激光多普勒血流图和CD31免疫组化染色结果显示o-HA软膏处理的大鼠伤口周围血流供应增多,血管新生,较基质组之间具有统计学差异(P0.05)。4、Western Blot提示o-HA软膏组p-Src、p-ERK和TGF-beta1蛋白的表达明显高于基质组(P0.01)。结论1、o-HA促进高糖环境下的HUVEC增殖、迁移和小管形成。2、局部应用o-HA软膏通过增加内皮细胞增值、迁移,血管新生,成纤维细胞、肉芽组织再生促进糖尿病大鼠伤口愈合。
[Abstract]:Objective to investigate the 1 oligosaccharides of hyaluronic acid on human umbilical vein endothelial cell proliferation, migration and angiogenesis of.2 effect, the research area of oligosaccharides of hyaluronic acid on wound healing in diabetic rats, the role of.3 around the wound blood supply and angiogenesis, to explore the mechanism of oligosaccharides of hyaluronic acid on wound healing in diabetic rats. Experimental diabetes in vivo and in vitro model research of hyaluronan oligosaccharides (Hyaluronic acid oligosaccharide, o-HA) on the healing of wounds in the body of diabetic rats. Glucose (33 mmol/L) induced human umbilical vein endothelial cells (Human Umbilical Vein Endothelial Cells, HUVEC) simulation model in vitro by MTT, diabetes, scratch and tubule formation the detection of o-HA in 10 g/m L concentration under the conditions of high glucose environment HUVEC proliferation, migration and tubule formation. The effect of o-HA ointment and its preparation by emulsification method For diabetic wound of rat model, for taking pictures, recording, observation of wound size and inflammation; HE staining of epithelial cells and fibroblasts, granulation tissue regeneration; laser Doppler flowmetry observed around the wound blood supply; CD31 immunohistochemical staining was used to detect the wound angiogenesis, wound tissue were detected by p-Src in the expression of p-ERK and TGF-beta1 proteins, the further study of o-HA by promoting endothelial cell proliferation, migration and angiogenesis to promote wound healing in diabetic rats. The results of the 1 MTT, the experimental results show that: the proliferation of cell numbers in o-HA group than the PBS group increased (P0.05); migration experiments showed that: o-HA group reduced the area of scratches increased significantly than in group PBS (P0.01), the scratch area reduction ratio is about 58%; the tube formation assay showed that: o-HA group the number of tube formation was more than PBS group, and has statistics The difference (P0.05).2, the successful preparation of oligosaccharides of hyaluronic acid and its ointment topical application to the wound of diabetic rat model of.3, HE staining and photographed observation results respectively from two angles and histology showed that giving oligosaccharides of hyaluronic acid ointment group rat wound healing condition was significantly higher than plausible matrix group wound healing fast and small area of.7 D, the two group wound healing area have obvious difference (P0.05); fibroblast, granulation tissue regeneration and epithelization degree was significantly higher than the matrix group increased, the difference has statistics difference (P0.01). The laser Doppler imaging and CD31 immunohistochemical staining showed that the o-HA ointment the wound of rat peripheral blood flow increased supply, angiogenesis, a matrix between groups with statistical difference (P0.05).4, Western Blot o-HA p-Src p-ERK ointment group, and the expression of TGF-beta1 protein was obviously higher than that of matrix group (P0. 01) conclusion 1, o-HA promotes HUVEC proliferation, migration and tubule formation.2 in high glucose environment. Topical application of o-HA ointment can promote endothelial cell proliferation, migration, angiogenesis, fibroblast, granulation tissue regeneration, and promote wound healing in diabetic rats.
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R965
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，本文编号：1750803
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