靶向性铂类抗肿瘤药物的制备及生物活性研究

发布时间：2018-04-29 08:32

  本文选题：铂类药物 + 靶向治疗　； 参考：《东南大学》2015年博士论文

【摘要】：癌症,又称恶性肿瘤,是一类严重威胁人类生命和健康的重要疾病。以顺铂、卡铂和奥沙利铂为代表的铂类抗肿瘤药一直是恶性肿瘤化疗的首选药物,在肿瘤治疗中占有重要的地位。尽管铂类抗肿瘤药物的研发已取得很大进展,但由于其缺乏对肿瘤细胞的选择性,仍会带来一系列严重的毒副作用。单克隆抗体能特异性识别肿瘤细胞,但其细胞杀伤能力较低,抗肿瘤效果有限,临床上主要是与非特异性的化学药物联合使用。近年来,肿瘤的靶向性治疗已成为了肿瘤领域的研究热点。采用化学方法将具有靶向性的抗体或抗体片段与具有良好药理活性的小分子铂类抗肿瘤药物进行连接,制备抗体药物偶联物,既能特异性的识别肿瘤细胞,又能高效地杀伤靶细胞,降低药物的毒副作用,从而可以达到高效低毒的治疗目的。本论文以顺铂和奥沙利铂为模型药物,设计并制备了两类铂类化合物,一类为四价铂化合物,以氨基、乙二胺和1R,2R-环己二胺为配基,氯离子或草酸根离子为离去基团,轴向对称引入可用于进一步修饰的羧酸根基团。另一类为二价铂化合物,以氨基和1R,2R-环己二胺为配基,谷氨酸根离子为离去基团引入氨基,与溶酶体酶可降解的缬氨酸-瓜氨酸二肽一端相连接,另一端引入羧酸根基团,用于与靶向载体连接。采用红外光谱、核磁、质谱及元素分析对化合物进行了结构表征,并采用CCK-8试剂盒测定了化合物对三种乳腺癌细胞,MCF-7, MDA-MB-231及SK-BR-3的体外抗肿瘤活性。与顺铂和奥沙利铂相比,铂化合物的抗肿瘤活性明显降低,对SK-BR-3细胞几乎不表现出生长抑制作用。本论文针对肿瘤细胞表面高度表达的Her2抗原,选用商业化抗体—曲妥珠单抗作为靶向载体,与上述铂类前体药物进行偶联,制备抗体药物偶联物。采用高效液相色谱、原子吸收光谱、BCA试剂盒对偶联物进行鉴定,计算药物／抗体比值。本论文所制备偶联物药物／抗体比值均在4-7范围内,为抗体药物偶联物药物／抗体比值的理想数值。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定了抗体偶联前后对Her2抗原和靶细胞SK-BR-3的亲和力变化,并通过荧光显微镜观察偶联物对Her2阳性表达细胞SK-BR-3及Her2阴性表达细胞MDA-MB-231的识别能力。在与铂物分子化学偶联后,曲妥珠单抗对Her2抗原及靶细胞的亲和力较偶联前有所下降,但也基本保持了其对Her2抗原和靶细胞的结合能力。偶联物与曲妥珠单抗一样均能识别位于细胞膜上的Her2抗原,特异性结合到Her2阳性表达的SK-BR-3细胞表面,而不与Her2阴性表达的MDA-MB-231细胞发生结合。采用CCK-8试剂盒测定了偶联物对三种乳腺癌细胞,MCF-7, MDA-MB-231及SK-BR-3的体外抗肿瘤活性。结果表明,偶联物对SK-BR-3细胞的细胞毒性显著提高,与顺铂的作用能力相当,且较奥沙利铂细胞毒性更强。而对于Her2蛋白表达含量低的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231,抗体四价铂偶联物在最高给药剂量的肿瘤细胞抑制率仍小于30%。利用流式细胞仪进行细胞周期检测,发生抗体-四价偶联物对SK-BR-3细胞的阻滞主要发生在G2/M期,而抗体-二价偶联物对SK-BR-3细胞的阻滞主要发生在S期。通过上述实验研究表明：曲妥珠-铂药偶联物能区分靶细胞和非靶细胞,特异性结合到Her2高表达的乳腺癌细胞表面,表现出较好的细胞毒性,降低对非靶细胞的损伤,为铂类抗肿瘤药物的靶向设计提供了一种新的思路。
[Abstract]:A kind of platinum compound is prepared and prepared by using cis - platinum and oxaliplatin as the ligand , and the other end of which can be used in the treatment of tumor cells . The anti - tumor activity of human Her2 - positive expression cell SK - BR - 3 and Her2 - negative expression cell MDA - MB - 231 was observed by fluorescence microscope .

【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R943

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 赖春丽;赖乐;赵建彬;陈建海;;聚轮烷-喜树碱偶联物的制备及其抗肿瘤作用[J];药学学报;2010年07期

2 林乔,何敏,李川江,冯玲玲,章咏裳,李龙承;抗人膀胱癌单克隆抗体与阿霉素偶联物的理化特性[J];湖北预防医学杂志;1997年03期

3 孙玉;于菲;孙柏旺;;靶向癌症治疗试剂——抗体-药物偶联物(英文)[J];药学学报;2009年09期

4 石依冉;王岩;陈少欣;;抗体-药物偶联药物的研究进展[J];世界临床药物;2013年12期

5 夏淑贞,刘自兵,吴蒙;生物素-卟啉偶联物的合成及表征[J];华中科技大学学报(自然科学版);2005年03期

6 詹新立;李世德;肖增明;周江南;;单克隆抗体导向的间接和小型化偶联物的体内抗肿瘤作用及机制初探[J];广西医科大学学报;2007年04期

7 张东华,唐锦治,沈关心,苏娜,朱慧芬;抗人胸腺细胞球蛋白与柔红霉素交联方法及其偶联物体外抗肿瘤作用[J];同济医科大学学报;1992年04期

8 张淑慧;张淑群;陈涛;梁国正;傅经国;;基于糖及其偶联物的靶向给药体系[J];肿瘤防治研究;2007年02期

9 刘金华;周洁;冷静;;穿膜肽与蛋白微球偶联物的制备及鉴定[J];黑龙江医药;2011年03期

10 刘文明;童德文;李立;邢明辉;赵俊;;抗肿瘤单克隆抗体药物的研究进展[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2006年08期

相关会议论文 前8条

1 马艳;刘虹;何红伟;邵荣光;;抗体-药物偶联物研究[A];第十二届全国抗生素学术会议论文集[C];2013年

2 李晓飙;廖共山;班建东;舒雨雁;汤圣希;;α-环毒素-转铁蛋白偶联物——一种新的镇痛研究手段[A];中国毒理学会生物毒素毒理专业委员会第4次、中国生物化学与分子生物学会毒素专业组第5次学术研讨会论文摘要[C];2001年

3 张春燕;舒雨雁;;神经生长因子偶联物对老年性痴呆动物模型的作用[A];中国毒理学会第三届全国学术会议论文（摘要）集[C];2001年

4 肖苏龙;周德敏;杨铭;张勇民;;新型2:1全甲基化-α-环糊精-富勒烯(C_(60))共价偶联物的合成(英文)[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年

5 李斌;甄永苏;;靶向CD13的平阳霉素偶联物的合成及其抗肿瘤活性研究[A];2013医学前沿论坛暨第十三届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2013年

6 刘小云;尚伯扬;刘秀均;甄永苏;;平阳霉素与单克隆抗体Fab’片段偶联物抑制肝癌生长与肿瘤肝转移[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

7 黄宣运;姜有声;胡鲲;杨先乐;;环丙沙星多克隆抗体的制备[A];2009年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2009年

8 何倩倪;谷登峰;吕兆启;袁燕;吐尔洪江;;抗牛布鲁氏菌单抗——四环素偶联物的制备及其特异性比较研究[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年

相关重要报纸文章 前2条

1 本报记者 白毅;抗体——药物偶联物时代来临[N];中国医药报;2013年

2 孙金花;抗体——药物偶联物:全面分析,确保安全有效[N];中国医药报;2012年

相关博士学位论文 前10条

1 黄蓉;靶向性铂类抗肿瘤药物的制备及生物活性研究[D];东南大学;2015年

2 赖春丽;聚轮烷—喜树碱偶联物（前体药物）给药系统的研究[D];南方医科大学;2010年

3 杨效宁;靶向抗肿瘤偶联物甲氨喋呤—偕二磷酸的毒性试验研究[D];四川大学;2005年

4 刘文胜;肿瘤细胞主动靶向米托蒽醌-胰岛素偶联物的研究[D];四川大学;2004年

5 李朝辉;几种抗CD20抗体偶联药物的制备与生物学活性初步研究[D];浙江大学;2013年

6 李伟;靶向抗肿瘤偶联物苯丙胺酸氮芥—已二酸桥—偕二磷酸的靶向性及疗效实验研究[D];四川大学;2007年

7 江敏;大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究[D];中国协和医科大学;1996年

8 黄宏靓;环糊精偶联低分子量聚乙烯亚胺构建新型非病毒转基因载体及其应用[D];浙江大学;2007年

9 郑艳波;基于靶向肽的强化融合蛋白和化学偶联物的制备与抗肿瘤作用研究[D];中国协和医科大学;2007年

10 刘小云;单克隆抗体导向药物分子小型化及抗肿瘤作用[D];中国协和医科大学;2000年

相关硕士学位论文 前10条

1 王秋翠;溶酶体可降解的铂药偶联物的设计与制备研究[D];东南大学;2015年

2 李元;近红外荧光脂质体的设计合成及其应用[D];东南大学;2015年

3 杨李霞;新型杯[4]芳烃-β-环糊精偶联物制备及其凝胶流变行为研究[D];安徽理工大学;2016年

4 方凯;聚乙二醇修饰的蓖麻蛋白毒素A链偶联物的制备及其生物学特性的研究[D];华中科技大学;2006年

5 叶威良;具有酸敏特性的阿霉素—叶酸偶联物的制备及其抗肿瘤活性研究[D];第四军医大学;2012年

6 刘金华;穿膜肽—抗体—蛋白微球偶联物的制备及鉴定[D];广西医科大学;2011年

7 李修乐;聚乙二醇化蛋白的修饰位点识别研究[D];山东农业大学;2013年

8 徐健;两种Pt-BSA偶联物的制备及其体外生物活性研究[D];云南大学;2012年

9 冯燕;SMCC法抗体定向偶联技术的优化与应用研究[D];华中科技大学;2011年

10 陈庭怡;GLP-1四聚体药物蛋白的制备及其药代动力学和药效学的研究[D];福建农林大学;2013年

，

本文编号：1819182