重组艾塞那肽—人血清白蛋白融合蛋白临床前药代动力学研究

发布时间：2018-05-17 21:03

  本文选题：重组艾塞那肽-人血清白蛋白融合蛋白 + 药代动力学　； 参考：《泰山医学院》2014年硕士论文

【摘要】：目的： 重组艾塞那肽-人血清白蛋白融合蛋白(E2HSA)临床前药代动力学研究。 方法： 建立化学发光酶联免疫检测法(CLEIA)测定猕猴血清中E2HSA的浓度并对其进行方法学确证；研究E2HSA在大鼠和猕猴体内的药代动力学特征；采用放射性同位素125I标记法对E2HSA在大鼠体内的组织分布和排泄特点进行研究。 结果： 1.测定生物样品中药物浓度的ELISA分析方法建立与确证 该方法可特异性地识别E2HSA的抗原表位，在2~200ng·mL-1的浓度范围时与血清中其它物质无明显交叉反应。方法学确证表明标准品E2HSA在2~200ng·mL-1浓度范围内，吸光度与浓度呈依赖关系，四参数Logistic拟合：Y（OD值）=A2＋(A1-A2)/(1+(X/X0)^P)，相关系数r均大于0.99，最低定量限为2ng·mL-1。批间和批内精密度为1.3~8.1%，准确度为-3.6~2.3%。样品在-20℃放置3个月稳定性良好，储备液在-20℃放置7天稳定性良好，稀释1000倍无稀释效应。该分析方法能够满足E2HSA临床前药代动力学研究。 2. Wistar大鼠、猕猴皮下注射E2HSA的药代动力学研究 Wistar大鼠单次皮下注射1.98mg·kg-1E2HSA后， E2HSA在大鼠体内消除半衰期t1/2为：12.2±1.2h，平均滞留时间MRTlast为：34.9±1.9h；血浆清除率CL为：19.1±5.6mL·h-1·kg-1，表观分布容积Vd为：381.4±50.7mL·kg-1，AUClast为91652.8±8119.1ng·h·mL-1。猕猴单次皮下注射0.3、0.9和2.7mg·kg-1E2HSA后，E2HSA在猕猴体内消除半衰期t1/2依次为：53.4±8.0h、50.9±9.1h、56.8±8.1h，三个剂量组间没有统计学差异；平均滞留时间MRTlast依次为：78.3±6.2h、89.0±7.6h、83.3±7.7h；消除速率常数ke依次为：0.013±0.003、0.014±0.003、0.015±0.006；血浆清除率CL依次为：1.66±0.27mL·h-1·kg-1、1.39±0.15mL·h-1·kg-1、1.36±0.12mL·h-1·kg-1，低剂量组和中剂量组有统计学差异，中剂量组合高剂量组没有统计学差异，低剂量组和高剂量组有统计学差异；表观分布容积Vd依次为：125.5±8.8mL·kg-1、103.8±28.4mL·kg-1、110.4±12.2mL·kg-1三个剂量组间没有统计学差异；AUClast依次为179182±27148ng·h·mL-1，630956±68878ng·h·mL-1，1928196±168615ng·h·mL-1（比例1：3.5：10.8），低、中和高给药剂量比为1：3：9，AUClast与给药剂量基本呈等比例增加。 猕猴皮下注射0.9mg·kg-1E2HSA每周1次，连续5次给药后，5只猕猴的蓄积因子（R）分别为0.91、1.07、0.80、0.62和0.63，，平均蓄积因子0.81±0.19。 猕猴皮下注射2.7mg·kg-1E2HSA对静脉注射0.9mg·kg-1E2HSA的生物利用度为81.9%。 3. Wistar大鼠皮下注射125I-E2HSA的组织分布和排泄研究 组织分布结果可见2h活杀后各组织的药物浓度顺序为：血清肺胃内容物肾脊髓小肠内容物肾上腺胃卵巢心膀胱输精管肝脾胰腺皮肤小肠骨骼子宫输卵管大肠胸腺睾丸脑肌肉大肠内容物脂肪。8h活杀后各组织的药物浓度顺序为：血清肺肾上腺肾胃内容物卵巢胃小肠内容物输卵管心输精管肝小肠脾脊髓膀胱睾丸子宫皮肤胰腺大肠骨骼脂肪胸腺脑肌肉大肠内容物。24h活杀后各组织的药物浓度顺序为：血清胃内容物皮肤肺膀胱胃输卵管肾卵巢输精管小肠大肠内容物肾上腺心子宫肝睾丸脾小肠内容物大肠骨骼胰腺脂肪脊髓胸腺肌肉脑。96h活杀后各组织的药物浓度顺序为：胃内容物膀胱血清大肠内容物脑皮肤肺肾肾上腺输精管肝胃卵巢小肠内容物输卵管子宫脊髓心小肠脾大肠胰腺睾丸骨骼胸腺肌肉脂肪。 雄性Wistar大鼠在皮下给予125I-E2HSA（1.98mg·kg-1）后，0~144h内从胆汁排泄的药物量占总给药量的3.97±1.29%。0~432h内从尿液排泄的药物量占总给药量的62.86±10.47%。0~432h内从粪便中排泄的药物量占总给药量为14.47±4.37%，代谢笼沾染回收到总给药量的2.83%±0.63%。 结论： 1.测定生物样品中药物浓度的ELISA分析方法建立与确证 建立了简单、灵敏、快速、可靠、特异性强的E2HSA全长药物检测方法，方法的特异性，准确度和精密度良好，符合生物分析方法指导原则要求。 2. Wistar大鼠、猕猴皮下注射E2HSA的药代动力学研究 E2HSA在猕猴体内消除半衰期t1/2三个剂量组间没有统计学差异；AUClast比例1：3.5：10.8，低、中和高给药剂量比为1：3：9，AUClast与给药剂量基本呈等比例增加，显示在0.3mg·kg-1~2.7mg·kg-1的剂量范围内E2HSA在猕猴体内的血清药物浓度呈线性动力学变化。 猕猴皮下注射0.9mg·kg-1E2HSA每周1次，连续5次给药后，平均蓄积因子0.81±0.19，提示皮下注射0.9mg·kg-1E2HSA每周1次，连续5次后猕猴体内血药浓度不会积聚增加，其中部分猕猴血药浓度会降低，推测可能有抗体产生。 猕猴皮下注射2.7mg·kg-1E2HSA的绝对生物利用度为81.9%，说明皮下注射可能是一种较为快速、方便、有效的用药途径。 3. Wistar大鼠皮下注射125I-E2HSA的组织分布和排泄研究 Wistar大鼠在皮下给予125I-E2HSA（1.98mg·kg-1）后，分别于2h、8h、24h、96h动物活杀后各组织酸沉后放射性结果显示：肾脏中药物含量一直较高，提示经尿排泄是一个主要的排泄途径；药物在脂肪、肌肉和脑组织中含量一直较低，说明E2HSA不易于进入脂性强的组织且不易透过血脑屏障；胃肠道中的含量一直较高，可能因为蛋白分解代谢中的碱性片段透过胃壁分泌到胃肠内容物中。 胆汁、粪尿排泄结果显示：粪便、尿液和代谢笼沾染共回收到总给药量的80.16%，说明125I-E2HSA给药后主要经尿排出体外。
[Abstract]:Objective:
Preclinical pharmacokinetics of recombinant human isserin human serum albumin fusion protein (E2HSA).
Method锛

本文编号：1902855