雌激素相关受体α调节剂细胞筛选模型的建立及应用

发布时间：2018-05-19 22:02

  本文选题：雌激素相关受体α + 反向激动剂　； 参考：《中国新药杂志》2015年03期

【摘要】：目的:建立一种筛选评价雌激素相关受体α(estrogen-related receptorα,ERRα)调节剂的细胞模型,并用于计算机辅助设计、人工合成的化合物样品的评价。方法:用p CMV-h ERRα,3×ERRE-Luc及pRL-TK共同转染人胚肾细胞HEK-293,加入阳性药XCT790或筛选化合物孵育,分别检测HEK-293中萤火虫荧光素酶及海肾荧光素酶的活性,建立基于受体-应答元件的ERRα调节剂细胞筛选模型,用Z'因子评价本模型的稳定性,并测试了83个化合物对ERRα转录调节活性。用CCK-8检测DLE2-24对乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制效应,用RT-PCR考察DLE2-24对MCF-7中ERRα靶基因SOD2及VEGF的mRNA水平的影响。结果:成功建立ERRα-ERRE-Luc基因瞬时共转染模型,阳性药XCT790的IC50为0.24μmol·L-1,Z'因子为0.68,信号/本底为20.7。应用本模型筛选出15个ERRα反向调节剂。其中,DLE2-24剂量依赖性地抑制MCF-7的增殖,显著下调了ERRα下游靶基因SOD2及VEGF的mRNA水平。结论:本研究成功建立了一种高效、可靠的ERRα调节剂细胞筛选模型,适用于ERRα调节剂的发现与评价。
[Abstract]:Aim: to establish a cell model for screening and evaluating estrogen related receptor 伪 estrogen-related receptor 伪 er 伪) modulators, and to evaluate the synthetic compounds by computer aided design (CAD). Methods: human embryonic kidney cells HEK-293 were co-transfected with p CMV-h ERR 伪 3 脳 ERRE-Luc and pRL-TK and incubated with positive drug XCT790 or screening compounds. The activities of luciferase and luciferase in HEK-293 were detected respectively. A cell screening model of ERR 伪 modulator based on receptor-response element was established. The stability of the model was evaluated by using Z' factor, and the transcriptional regulatory activity of 83 compounds to ERR 伪 was tested. The inhibitory effect of DLE2-24 on MCF-7 proliferation in breast cancer cells was detected by CCK-8, and the effect of DLE2-24 on ERR 伪 target gene SOD2 and mRNA level of VEGF in MCF-7 was investigated by RT-PCR. Results: the transient cotransfection model of ERR 伪 -ERRE-Luc gene was successfully established. The IC50 of positive drug XCT790 was 0.24 渭 mol L -1 Z' factor was 0.68, and the signal / background was 20.7. Fifteen ERR 伪 reverse modulators were screened by this model. DLE2-24 inhibited the proliferation of MCF-7 in a dose-dependent manner and significantly down-regulated the mRNA levels of ERR 伪 downstream target gene SOD2 and VEGF. Conclusion: a high efficient and reliable cell screening model of ERR 伪 modulator was established in this study, which is suitable for the discovery and evaluation of ERR 伪 modulator.
【作者单位】： 复旦大学附属华山医院临床药学室;复旦大学附属华山医院北院临床药学室;上海市徐汇区中心医院药械科;齐鲁工业大学化工与制药系;
【基金】：国家自然科学基金(81302853,81202389) 教育部“高校博士点”基金(20110071120071)
【分类号】：R965.1

【参考文献】

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本文编号：1911863