氧化还原响应性糖脂纳米递释系统的构建与评价

发布时间：2018-05-26 17:38

  本文选题：氧化还原响应 + 壳聚糖　； 参考：《浙江大学》2015年博士论文

【摘要】：纳米给药系统在肿瘤治疗中的应用发展迅速,但仍存在药物泄露、载药量低、靶向性不足等缺陷,因此有关智能型药物递释系统的设计已逐渐成为药剂学领域的研究热点之一。环境响应性药物递释系统可针对肿瘤与正常组织的生理差异,将包封的药物选择性地富集于肿瘤组织,实现靶部位的环境响应性药物递释,提高抗肿瘤疗效并降低毒副作用。利用肿瘤细胞内外还原型谷胱甘肽(GSH)的浓度差异(100～1000倍),以及肿瘤细胞与正常细胞之间的浓度差异(7～10倍),本研究旨在构建一种选择性响应肿瘤细胞内外氧化还原电位差的智能型药物载体,实现药物高效安全递释。本文的主要内容如下：以二硫键为桥链,以壳聚糖为亲水链、硬脂胺为疏水链,两步法合成具有氧化还原响应性的糖脂嫁接物CSO-ss-SA。CSO-ss-SA可在水性介质中自聚集,形成类球形胶束,粒径小于100nm。能够在10mM GSH还原条件下发生胶束解聚,具有典型的还原敏感性。以紫杉醇(PTX)为模型药物,透析法制备药物递释系统(载药纳米粒,CSO-ss-SA/PTX),载药量较高(-27%,w/w),可在10mM GSH还原条件下,快速释放所包封的PTX。体外细胞摄取结果表明,CSO-ss-SA嫁接物胶束能够被细胞快速摄取。以尼罗红为模型药物,分别与肿瘤细胞、正常细胞共孵育12h,证实载药纳米粒可响应特异性肿瘤细胞内的氧化还原电位,实现药物的高效释放,而在正常细胞内基本不释放药物。CSO-ss-SA/PTX的IC50值,分别为阳性对照泰素和非敏感糖脂嫁接物(CSO-SA)载药纳米粒的7.55%和13.2%,且与细胞内谷胱甘肽浓度呈负相关。以荷瘤裸鼠为模型动物,证实嫁接物胶束具有肿瘤被动靶向性,能特异性响应肿瘤组织及细胞内高浓度的还原条件,在12h内快速释药,且保持在正常组织内72h内基本不释放状态。模型动物抗肿瘤药效结果表明,载药纳米粒抑瘤率为88.4%,明显高于阳性对照的抑瘤率59.4%。本文构建了基于CSO-ss-SA嫁接物胶束的共递释系统,分别用于递释PTX和小分子干扰RNA(siRNA).含阳离子的CSO-ss-SA嫁接物胶束,可有效密接siRNA,并在lOmM GSH还原条件下快速释放所密接的siRNA。嫁接物能有效递释siRNA至肿瘤细胞,具有内-溶酶体逃逸功能。通过荧光共振能量转移及分子信标技术证实,嫁接物可特异性响应细胞内氧化还原电位差而释放出siRNA,并实现了有效的沉默细胞内靶基因表达(85.8%)。以肿瘤细胞及其耐药细胞为模型细胞,CSO-ss-SA嫁接物胶束包封PTX并同时密接特异性针对B细胞淋巴瘤(Bcl-2)靶序列的siRNA,共递释系统主要通过高效的细胞周期协同阻滞效应,实现协同增效治疗,并体现出克服耐药作用。为减少网状内皮系统吞噬,进一步提高抗肿瘤疗效,本文构建了PEG化的二硫键糖脂嫁接物(PEG-CSO-ss-SA)作为基因治疗载体,应用于pDNA的递释。PEG-CSO-ss-SA胶束可有效密接pDNA,并保护pDNA免受核酶降解,可响应lOmM GSH还原条件,快速释放所密接的DNA。PEG的表面修饰明显降低巨噬细胞的吞噬,使嫁接物胶束的肿瘤细胞摄取速率略有降低,并能有效转染肿瘤细胞,其转染效率与阳性对照脂质体相当。PEG-CSO-ss-SA嫁接物胶束可递释表达野生型p53质粒,有效上调细胞内p53表达,并诱导肿瘤细胞凋亡,且其诱导凋亡的能力与细胞内谷胱甘肽浓度呈正相关。体内研究表明,PEG修饰后可延长嫁接物胶束在体内的循环时间,增加其在肿瘤部位的蓄积。尾静脉注射PEG-CSO-ss-SA密接p53质粒复合物,可检测到肿瘤内质粒表达,并通过肿瘤切片染色证实其促肿瘤细胞凋亡能力。
[Abstract]:A new type of drug delivery system , CSO - ss - SA / PTX , has been developed rapidly in the presence of tumor cells and normal cells . PEG - CSO - ss - SA ( PEG - CSO - ss - SA ) was used as a gene therapy vector .
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R943

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本文编号：1938231