弱化抗性标记筛选高表达CHO细胞株的方法建立

发布时间：2018-06-13 09:24

  本文选题：中国仓鼠卵巢细胞 + 新霉素磷酸转移酶　； 参考：《中国药科大学学报》2015年05期

【摘要】：为了优化中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达体系,建立高表达CHO细胞株筛选方法,将外源基因表达载体上抗性筛选基因表达的新霉素磷酸转移酶(NPT)的261位氨基酸天冬氨酸突变成甘氨酸。经G418筛选,转染含突变型NPT表达载体的细胞存活率显著低于转染含野生型NPT表达载体的细胞存活率。以绿色荧光蛋白-抗体Ig G1 Fc结构域融合蛋白为报告基因,验证了突变后新霉素磷酸转移酶对抗生素G418抗性减弱。经G418持续加压培养3周后,转染含突变型NPT表达载体的细胞中EGFP的表达量显著高于转染含野生型NPT表达载体的细胞,表明其具有筛选出高表达单克隆细胞株的潜力。
[Abstract]:In order to optimize the expression system of Chinese hamster ovary cells ( CHO ) and to establish a high - expression CHO cell line screening method , the 261 - position amino acid aspartic acid of a new chloramphenicol phosphotransferase ( NPT ) expressed by the resistance screening gene on the exogenous gene expression vector was mutated into glycine . After 3 weeks of G418 selection , the expression of EGFP in the cells transfected with the mutant NPT expression vector was significantly higher than that transfected with the wild - type NPT expression vector .
【作者单位】： 中国药科大学生命科学与技术学院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.81430082)~~
【分类号】：R96;Q813

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本文编号：2013533