鱼藤酮对SH-SY5Y细胞中核仁素、α-突触核蛋白和DJ-1相互作用的影响

发布时间：2018-06-13 13:38

  本文选题：核仁素 + 帕金森病　； 参考：《毒理学杂志》2015年01期

【摘要】：目的探索在鱼藤酮(Rotenone)染毒的SH-SY5Y细胞中,核仁素(Nucleolin,NCL)与两种已知与帕金森病(Parkinson Disease,PD)相关的基因α-Synuclein和PARK7(Parkinson disease protein 7,又称DJ-1)编码的蛋白α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)和DJ-1的相互作用。方法采用MTT法检测鱼藤酮(20、100和500 nmol/L)染毒SH-SY5Y细胞24 h和3 d后对细胞存活率的影响;采用免疫荧光染色法(Immunofluorescent staining,IF)分别染色3种蛋白,在共聚焦显微镜下观察蛋白的亚细胞定位,分析3种蛋白在空间上的关系;采用免疫沉淀法(Immunoprecipitation,IP)和免疫蛋白印记(Western Blot,WB)法检测染毒前后核仁素分别与DJ-1和α-Synuclein的相互作用。结果用鱼藤酮(20、100和500 nmol/L)染毒SH-SY5Y细胞24 h后,各个染毒组细胞存活率改变与对照组比较差异没有统计学意义(P0.05);染毒3 d后20 nmol/L染毒组细胞存活率改变与对照组比较差异没有统计学意义(P0.05),而100和500 nmol/L染毒组细胞存活率改变与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。激光共聚焦分析显示DJ-1和核仁素分布于SH-SY5Y细胞核和细胞质中,而α-Synuclein分布于细胞质中,核仁素与DJ-1和α-Synuclein都有共定位。鱼藤酮染毒SH-SY5Y细胞前后,核仁素分别与DJ-1和α-Synuclein免疫共沉淀后,免疫蛋白印迹结果显示核仁素与二者均可形成蛋白复合体。结论在SH-SY5Y细胞中核仁素与DJ-1和α-Synuclein都存在蛋白-蛋白相互作用,染毒鱼藤酮后核仁素与DJ-1和α-Synuclein的相互作用并没有消失,提示核仁素可能是帕金森病相关蛋白。
[Abstract]:Objective to explore the interaction of 伪 -Synuclein (伪 -Syn-NCLs) and two known genes associated with Parkinson disease (PD), 伪 -Synuclein and PARK7 disease protein 7 (also known as DJ-1) in SH-SY5Y cells exposed to rotenone (Rotenone), and the interaction between 伪 -Synuclein (伪 -Syn-NCL-1) and DJ-1. Methods MTT assay was used to detect the effect of rotenone 2000 and 500nmol / L on cell survival of SH-SY5Y cells exposed to rotenone for 24 h and 3 days, and immunofluorescence staining was used to detect the subcellular localization of SH-SY5Y cells under confocal microscope. The spatial relationship of the three proteins was analyzed, the interaction of nucleolus with DJ-1 and 伪 -Synuclein was detected by immunoprecipitation IPB and Western blotWB. Results SH-SY5Y cells were exposed to rotenone at 20100 and 500 nmol / L for 24 h. There was no significant difference in cell survival rate between each exposure group and the control group, but there was no significant difference in cell survival rate between 20 nmol / L group and control group 3 days after exposure, while 100 and 500 nmol / L groups were fine. The change of cell survival rate was significantly different from that of control group (P 0.05). Laser confocal analysis showed that DJ-1 and nuclein were distributed in the nucleus and cytoplasm of SH-SY5Y, while 伪 -Synuclein was distributed in cytoplasm, and nuclein was colocated with DJ-1 and 伪 -Syin. Before and after rotenone was exposed to SH-SY5Y cells, nucleolus was co-precipitated with DJ-1 and 伪 -Synuclein, and the immunoblotting results showed that nuclein and 伪 -Synuclein could form protein complex. Conclusion the protein-protein interaction exists in SH-SY5Y cells with DJ-1 and 伪 -Synuclein. The interaction between nuclein and DJ-1 and 伪 -Synuclein in SH-SY5Y cells does not disappear after rotenone exposure, suggesting that nuclein may be a Parkinson's disease related protein.
【作者单位】： 首都医科大学公共卫生学院;北京市疾病预防控制中心;北京市预防医学研究中心卫生毒理所 北京市食物中毒诊断溯源技术重点实验室;新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心;
【分类号】：R994

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：2014201