利拉鲁肽对高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

发布时间：2018-06-13 20:10

  本文选题：高糖 + 内皮细胞　； 参考：《蚌埠医学院》2014年硕士论文

【摘要】：目的：研究高糖对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中细胞核因子.κ B(NuclearFactor kappa B，NF-κ B)、细胞上清液中半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、8羟基脱氧鸟嘌呤（8-OHdG）表达的影响及Liraglutide的干预作用，进一步探讨Liraglutide是否能够真正有效地保护损伤的血管内皮细胞，为糖尿病血管并发症的防治提供新思路。 方法：体外培养HUVECs，用不同浓度的葡萄糖（分别为：5.5、11.1、25、33.3mmol/L）培养液或高糖(33.3mmol/L)加入不同浓度的“利拉鲁肽”（5、10、25、50、100nmol/L）分别孵育细胞24、48h，用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测各实验组细胞生存率；根据MTT检测结果将细胞分为5组，分别是对照组（5.5mmol/L葡萄糖）、高糖组（33.3mmol/L）、高糖(33.3mmol/L)+低剂量利拉鲁肽组（25nmol/L）、高糖(33.3mmol/L)+中剂量利拉鲁肽组（50nmol/L）、高糖(33.3mmol/L)+高剂量利拉鲁肽组（100nmol/L），分别孵育24、48h后使用RT-PCR测定各实验组HUVECs中NF-κB mRNA的表达量，酶联接免疫吸附剂测定(ELISA)法测定各实验组细胞上清液中Caspase-3、8-OHdG的表达水平。所得数据采用SPSS19.0软件进行统计分析。 结果： 1.MTT法检测细胞生存率：与对照组(葡萄糖终浓度为5.5mmol/L)相比,25、33.3mmol/L葡萄糖浓度组在不同孵育时间（24、48h）其OD值减少均具有统计学意义(P0.01)，其中“高糖组”(葡萄糖终浓度为33.3mmol/L)OD值减小最明显(P0.01),且在一定的高糖浓度(33.3mmol/L)作用下,病变随着时间的延长而逐渐加重(P0.01)；而与“高糖组”相比,加入了不同浓度的“利拉鲁肽组”OD值均较“高糖组”有所提高,其中25、50、100nmol/L“利拉鲁肽组”和“高糖组”比较,各实验组在不同孵育时间（24、48h）其OD值升高均有统计学意义(P0.01)，尤其“利拉鲁肽”浓度为100nmol/L时,作用最强。 2.RT-PCR测定HUVECs细胞中NF-κB mRNA的表达量：对照组HUVECs中NF-κB mRNA表达水平较低；高糖组HUVECs中NF-κB mRNA水平较正常环境显著增加（P0.01）；经不同浓度“利拉鲁肽”干预后，HUVECs中NF-κB的mRNA水平较干预前显著减少，，其中利拉鲁肽(50、100nmol/1)干预24、48h的NF-κBmRNA表达均有统计学意义(P0.01)。利拉鲁肽和HUVECs共同孵育24小时后,随着利拉鲁肽浓度(25、50、100nmol/L)的增加, NF-κB mRNA表达水平明显减少(P0.01)。 3.ELISA法测定HUVECs细胞上清液中Caspase-3、8-OHdG的表达水平：与对照组相比,高糖组HUVECs细胞Caspase-3、8-OHdG分泌量明显增加(P0.01),而与高糖组相比,经不同浓度“利拉鲁肽”作用后,HUVECs细胞Caspase-3、8-OHdG分泌量明显降低,并与“利拉鲁肽”呈浓度依赖性，其中“高糖+高剂量利拉鲁肽”组与“高糖”组比较有统计学意义(P0.01)。 结论： 1.高糖加速了体外培养的人脐静脉内皮细胞的损伤,且细胞损伤的程度具有剂量和时间依赖性。 2.Liraglutide降低细胞内NF-κ B mRNA的表达,减少HUVECs中氧化应激反应。 3.Liraglutide降低细胞上清液中Caspase-3、8-OHdG的表达，减少高糖诱导的内皮细胞凋亡，同时减轻内皮细胞的氧化损伤。 4.Liraglutide对体外高糖诱导的内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与NF-κ B mRNA、Caspase-3、8-OHdG表达降低相关。
[Abstract]:Objective: To study the effect of high glucose on nuclear factor kappa B (NuclearFactor kappa B, NF- kappa B) in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), the expression of cysteine proteinase -3 (Caspase-3), 8 hydroxy deoxy guanine (8-OHdG) in cell supernatant and the use of Liraglutide dry preparation, and further explore whether Liraglutide can be effectively protected. Damaged vascular endothelial cells provide new ideas for the prevention and treatment of diabetic vascular complications.
Methods: HUVECs was incubated in vitro, and the cells were incubated with different concentrations of glucose (5.5,11.1,25,33.3mmol/L) or high glucose (33.3mmol/L) with different concentrations of "5,10,25,50100nmol/L" (5,10,25,50100nmol/L), and the cell survival rates were detected by MTT (four methylazazolium salt) method, and the results of MTT detection would be based on the results of MTT detection. The cells were divided into 5 groups: the control group (5.5mmol/L glucose), the high glucose group (33.3mmol/L), the high sugar (33.3mmol/L) + low dose RRRRP group (25nmol/L), the high glucose (33.3mmol/L) + medium dose RRRRP group (50nmol/L), the high glucose (33.3mmol/L) + high dose rrrru group (100nmol/L), and the RT-PCR were incubated with RT-PCR to determine the HUVECs of the experimental group. The expression of NF- kappa B mRNA, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) method was used to determine the expression level of Caspase-3,8-OHdG in the cell supernatant of the experimental groups. The data obtained were analyzed by SPSS19.0 software.
Result锛

本文编号：2015261