珐菲亚质量标准建立及改善睡眠作用研究

发布时间：2018-06-19 13:22

  本文选题：珐菲亚 + 氨基酸测定　； 参考：《山东中医药大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:建立包含珐菲亚水分、总灰分、浸出物、氨基酸、蜕皮甾酮含量及指纹图谱的质量标准体系,同时探索珐菲亚对睡眠的改善作用及其作用机制。方法:(1)采用柱前衍生RP-HPLC法同时测定珐菲亚中14种水解氨基酸,衍生化试剂为异硫氰酸苯酯,HPLC-PDA法测其蜕皮甾酮的含量及其指纹图谱的建立,色谱条件:色谱柱为waters Xbridge RP18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相组成为乙腈和水,梯度洗脱,流速为:0.8m L/min,检测波长为265nm,柱25℃。(2)采用腹腔注射阈剂量和阈下剂量戊巴比妥钠的协同睡眠实验,观察统计小鼠睡眠潜伏期、睡眠时间和睡眠发生率,研究珐菲亚对睡眠的改善作用,同时采用ELISA法测定小鼠皮质、海马和下丘脑中DA、NE、5-HT、GIU、NO、NOS的含量研究其改善睡眠作用的机制。结果:(1)4批次珐菲亚中平均水分、总灰分、浸出物的含量分别在8.32%~8.48%、3.93%~4.12%、14.72%~15.47%和12.12%~13.07%范围以内;被测定的14种氨基酸在一定浓度范围内具有良好的线性关系,线性相关系数r值均大于0.9990,加样回收率(n=6)为90.2%~105.1%之间,在24小时内氨基酸衍生溶液稳定性较好;珐菲亚中蜕皮甾酮的含量在279ng/m L~1023ng/m L范围内呈现良好的线性关系(R2=0.9992),标准曲线为Y=53364X+23088,加样回收率(n=6)为99.54%(RSD=1.35%)。珐菲亚中蜕皮甾酮的平均含量为8.904mg/g;建立了珐菲亚的HPLC-PDA指纹图谱,获得了以蜕皮甾酮为参照物在内的10个共有峰,对10个批次样品进行色谱指纹图谱分析,建立珐菲亚的共有模式,以夹角余弦计算样品与共有模式之间的相似度,结果相似度均大于0.97。(2)珐菲亚对阈上剂量戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间影响的研究表明:与空白对照组相比较,地西泮组能显著缩短小鼠的睡眠潜伏期并延长戊巴比妥钠所致小鼠的睡眠时长(P0.01),表明该实验方法可靠。与空白对照组相比较,珐菲亚水提物组较其他各组对缩短小鼠睡眠潜伏期和延长睡眠时间效果更显著(P0.05)。(3)珐菲亚对阈下剂量戊巴比妥钠所致小鼠睡眠发生率影响的研究表明:与空白对照组相比较,地西泮组能明显增高小鼠的睡眠发生率(P0.01),表明该实验方法可靠。与空白对照组相比较,珐菲亚水提组较其他各组对增加小鼠睡眠发生率效果更显著(P0.05)(4)珐菲亚有效部位(水提物)改善睡眠的作用在一定剂量范围内呈现一定的量效关系,随着给药量增加,其改善睡眠的作用增强,主要表现为延长戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间(P0.05)和缩短其睡眠潜伏期(P0.05),其起效剂量为12g生药/kg体重,最佳有效剂量为16g生药/kg体重。(5)珐菲亚有效部位(水提物)改善睡眠的作用在一定时间范围内呈现一定的时效关系,随着给药时间的增加,其改善睡眠的作用增强。主要表现为延长戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间(P0.05)和缩短其睡眠潜伏期(P0.05),其起效给药时间为10天,最佳给药时间为14天。(6)珐菲亚水提物(16g生药/kg体重),连续给药14天,与空白组比较,能显著降低小鼠海马中DA、NE(P0.05)和5-HT(P0.05)的含量,明显增加小鼠海马中NO(P0.05)和NOS的含量;能显著降低小鼠皮质中DA、GLU的含量(P0.01),有降低小鼠皮质中NE、5-HT的趋势,显著增加小鼠皮质中NOS的含量(P0.05);能显著降低小鼠下丘脑中GLU的含量(P0.05),有增加小鼠下丘脑中NO含量的趋势。结论:建立了珐菲亚质量标准体系,可以对不同产地珐菲亚中化学成分的含量进行差异比较,为珐菲亚的质量控制与评价提供一定的科学依据。珐菲亚改善睡眠作用的有效部位为水提部位,最佳给药量为16g生药/kg体重,最佳给药时间为14天;珐菲亚改善睡眠作用的机制为减少DA、NE、GLU等中枢性神经递质在脑中的分泌、释放,促进NOS的合成、分泌,提高NO在脑内的含量,并抑制5-羟色胺能神经元,降低5-羟色胺的分泌实现改善睡眠的作用。初步推断珐菲亚改善睡眠作用的有效物质为蜕皮甾酮。
[Abstract]:Objective : To establish a quality standard system containing water , total ash , extract , amino acid , ecdysterone and fingerprint of F . fafiya , and to explore the effect and mechanism of F . fafiya on sleep . Methods : ( 1 ) The HPLC - PDA method was used to determine the content of ecdysterone and its fingerprint . The chromatographic conditions were as follows : ( 1 ) The chromatographic column was Waters Xbridge RP18 column ( 4.6mm 脳 250mm , 5渭m ) . The mobile phase consisted of acetonitrile and water . The flow rate was 0.8 m L / min , the detection wavelength was 265 nm , and the column was 25 鈩，

本文编号：2040027