液质联用和免疫比浊法测定三种抗肿瘤药物血浓度相关性研究

发布时间：2018-06-22 23:38

  本文选题：高效液相色谱串联质谱法 + 纳米增强免疫比浊法　； 参考：《山东大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:1.建立简便、灵敏的高效液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)测定患者血浆中5-氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉醇(PTX)和多西紫杉醇(DTX)的浓度。2.采用免疫比浊法即纳米增强免疫比浊法(nanoparticle immunoassay,NPIA)测定患者血浆5-FU、PTX和DTX浓度。3.比较LC-MS/MS和NPIA两种方法5-FU、PTX和DTX血浆浓度测定结果的相关性。方法:1.LC-MS/MS方法:5-FU:色谱条件:色谱柱:DiamonsilC18柱(150 mm × 4.6 mm,5μm);流动相:0.05%氨水:甲醇(2:98,v/v),在线脱气;流速:0.3 mL/min;柱温:30℃。血浆样本经液液萃取处理后,进样体积为10 μL进行分析。PTX和DTX:色谱条件:色谱柱:Diamonsil C18柱(150 mm × 4.6 mm,5 μm);流动相:0.1%甲酸:乙腈(40:60,v/v),在线脱气;流速:0.6 mL/min;柱温:30℃。血浆样本经沉淀蛋白处理后,进样体积10μL进行分析。2.NPIA方法:5-FU、PTX和DTX血浆样品按一定操作程序(采用专属试剂盒)处理后,注入CS-600B全自动生化仪进行分析。3.统计学分析:(1)以LC-MS/MS方法测定值为自变量X,以NPIA方法测定值为因变量Y,经SPSS.17.0进行线性回归分析,建立一元线性回归模型,评价两者相关性。(2)对LC-MS/MS方法和NPIA方法测定血浆5-FU、PTX和DTX浓度的结果进行Bland-Altman数据处理,评价两种方法测定结果的一致性。结果:1.本课题建立的LC-MS/MS方法专属性强,血浆中的杂质对5-FU、PTX和DTX的测定无影响。5-FU、PTX和DTX的方法学验证中,基质效应平均值分别为104.40%、107.18%和112.57%,绝对回收率的平均值分别为80.61%、99.41%和95.76%,日内和日间的准确度与精密度分别为88.2%-109.4%、100.1%-115.7%和 95.1%-100.2%,RSD%为 3.95-13.69、2.49-9.66 和 2.88-11.9,5-FU、PTX 和 DTX 分别在 10-800 ng/mL、10-200 ng/mL 和 10-2000 ng/mL 范围内有良好的线性关系(R20.99)。5-FU、PTX和DTX的血浆样本稳定性好,符合测定要求。2.LC-MS/MS和NPIA两种方法测定5-FU、PTX和DTX的线性回归方程分别为 y=1.019x-8.746(R=0.939,p0.001)、y=0.839x+17.975(R=0.878,p0.001)和y=1.105x+10.003(R=0.965,p0.001),因此可认为两种方法显著相关。3.LC-MS/MS方法测定5-FU、PTX和DTX样本平均值分别为273.82 ng/mL、43.56 ng/mL 和 378.1 ng/mL,NPIA 方法测定平均值分别为 270.18 ng/mL、54.49 ng/mL和427.7ng/mL,两种方法的95%的置信区间分别为-132.5～125.2ng/mL、-11.6～33.4 ng/mL和-231.7～331.1 ng/mL说明两种检测方法无显著性差异,可认为两种检测方法测定结果的一致性良好。结论:1.本课题分别建立了检测血浆中5-FU、PTX和DTX浓度的LC-MS/MS方法,此方法高效、灵敏、准确,适用于5-FU、PTX和DTX血浆浓度监测。2.NPIA方法测定患者血浆5-FU、PTX和DTX浓度,方法灵敏、高效、简便、快速、自动化程度高、样品需求体积量少。适用于5-FU、PTX和DTX血浓度临床常规监测。3.NPIA方法测定5-FU、PTX和DTX血浓度值和LC-MS/MS方法测定值,二者具有显著相关和临床一致性界限。NPIA作为常规临床监测方法可以在临床上推广应用,这可为临床医师诊断患者病情和为患者设计个体化用药方案提供一定的理论依据。
[Abstract]:Purpose 1. A simple and sensitive high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS / MS) was established to determine the concentrations of 5-fluorouracil (5-FU), paclitaxel (PTX) and docetaxel (DTX) in plasma of patients. The plasma concentrations of 5-FU PTX and DTX were measured by nanoparticle immunoturbidimetry (nanoparticle immunoturbidimetry). To compare the correlation between 5-FUUPTX and DTX plasma concentration by LC-MS / MS and NPIA. Methods: 1. LC-MS / MS method: chromatographic condition: column: Diamonsil C18 (150mm 脳 4.6mm ~ 5 渭 m); mobile phase: 0.05% ammonia: methanol (2: 98 v / v), on-line degassing; flow rate: 0.3 mL / min; column temperature: 30 鈩，

本文编号：2054719