他克莫司对血小板功能影响的体外研究

发布时间：2018-06-23 11:15

  本文选题：他克莫司 + 流式细胞术　； 参考：《苏州大学》2015年硕士论文

【摘要】：【目的】观察他克莫司(Tacrolimus,FK506)在体外对血小板功能的影响。【方法】收集18-25岁、两周内未服用任何药物的健康志愿者的空腹新鲜静脉全血,分离得到洗涤血小板及富含血小板血浆(Platelet rich plasma,PRP)。洗涤血小板(3×108/ml)与不同浓度他克莫司或者阴性对照二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)于37℃孵育2小时,使用流式细胞仪检测血小板线粒体跨膜电位(Mitochondrial inner transmembrane potential,ΔΨm)变化、血小板活化指标P-选择素(P-selectin)的结合率。使用Western Blot检测他克莫司与正常人洗涤血小板孵育后的血小板促凋亡蛋白Bax,抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL的表达和Caspase-3的活化情况。同时我们研究了他克莫司对不同致聚剂诱导的血小板聚集功能的影响,探讨他克莫司是否损伤血小板功能,将洗涤血小板与他克莫司(0.06μM)或阴性对照(DMSO)于37℃孵育2小时后,洗涤血小板中分别加入胶原(Collagen,5μg/m L)、凝血酶(Thrombin,0.1 U/m L)、瑞斯托霉素(Ristocetin,1.25 mg/m L),1000 rpm剪切力的情况下,使用血小板聚集仪检测血小板聚集程度。【结果】1.临床限制浓度下的他克莫司不会诱导血小板凋亡体外研究结果显示,与正常阴性对照相比,临床限制浓度下的他克莫司不会诱导血小板ΔΨm去极化,血小板抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL无变化,他克莫司的浓度增高2000倍才检测到线粒体膜电位下降及Caspase-3活化裂解。以上实验结果表明,在临床限制药物浓度的情况下,他克莫司不会诱导血小板发生凋亡。2.他克莫司对不同刺激剂诱导的血小板聚集功能的影响,因刺激剂不同而异既往研究证明,他克莫司可影响二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate,ADP)、胶原蛋白、瑞斯托霉素诱导的全血及PRP中血小板的聚集功能,然而,在洗涤血小板中,他克莫司是否影响血小板聚集功能还不清楚。我们通过研究表明,他克莫司能加强胶原诱导的血小板聚集,抑制凝血酶诱导的血小板聚集,对瑞斯托霉素及血管性血友病因子(Von willebrand factor,VWF)诱导的血小板聚集无明显作用,提示不同刺激剂对他克莫司诱导的血小板的聚集功能有不同的影响。【结论】综上所述,临床限制浓度的他克莫司不会诱导血小板凋亡,他克莫司对不同刺激剂诱导的血小板聚集功能有不同的影响。本实验为合理地使用他克莫司提供了更加科学的实验依据。
[Abstract]:[objective] to observe the effect of tacrolimus FK506 on platelet function in vitro. [methods] fasting fresh venous whole blood was collected from healthy volunteers aged 18-25 years without taking any drugs within two weeks. Platelet rich plasma-rich plasma (PRP) was isolated from washed platelets. Washed platelets (3 脳 108/ml) were incubated with different concentrations of tacrolimus or dimethyl sulfoxide (Dimethyl sulfoxide DMSO) at 37 鈩，

本文编号：2056935