氨氯地平拮抗ox-LDL损伤大鼠骨髓源性内皮祖细胞血管样结构形成及机制

发布时间：2018-07-29 17:19

【摘要】：目的探索氨氯地平拮抗氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤大鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPC)血管样结构形成及其作用机制。方法实验分为对照组、ox-LDL组(50 mg/L ox-LDL)和氨氯地平组(50 mg/L ox-LDL+0.5μmol/L氨氯地平)。差异贴壁法培养分离EPC,ac-LDL摄取和结合UEA-1鉴定EPC,Transwell测定细胞迁移,Matrigel法测血管生成,Western blot和RT-PCR分别检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的蛋白水平和mRNA表达情况,DCFH-DA法检测活性氧(ROS)水平,Griess法测定一氧化氮(NO)含量。结果 EPC经50 mg/L的ox-LDL处理后,细胞的迁移能力下降近3倍,血管样结构形成能力明显下降,用0.5μmol/L氨氯地平干预可部分恢复EPC的迁移能力,并显著恢复EPC的血管样结构形成能力(P0.05)。机制研究发现,ox-LDL下调EPC e NOS mRNA和蛋白表达水平,显著减少NO的含量(P0.01),氨氯地平显著拮抗ox-LDL的上述作用;EPC经50 mg/L的ox-LDL处理后,细胞内ROS含量显著增加(P0.01),氨氯地平显著减少胞内ROS的水平(P0.05)。结论氨氯地平对ox-LDL损伤EPC血管样结构的形成有显著拮抗作用,其作用与上调e NOS表达和降低细胞内ROS水平有关。
[Abstract]:Objective to investigate the antagonistic effect of amlodipine on vascular formation of bone marrow derived endothelial progenitor cells (EPC) in rats with oxidative low density lipoprotein (ox-LDL) and its mechanism. Methods the rats were divided into control group (50 mg/L ox-LDL) and amlodipine group (50 mg/L ox-LDL 0.5 渭 mol/L amlodipine). Isolation of EPCA ac-LDL by differential adherent method and identification of EPCA by UEA-1. Western blot and RT-PCR were used to detect the protein level and mRNA expression of endothelial nitric oxide synthase (e NOS). DCFH-DA was used to detect reactive oxygen (ROS) (Ros). The content of nitric oxide (NO) was determined by level Griess method. Results after EPC was treated with 50 mg/L ox-LDL, the migration ability of the cells decreased nearly 3 times, and the ability of angioid structure formation was obviously decreased. 0.5 渭 mol/L amlodipine could partially restore the migration ability of EPC and significantly restore the vascular like structure formation ability of EPC (P0.05). It was found that ox-LDL down-regulated the expression of EPC e NOS mRNA and protein and significantly reduced the content of no (P0.01). Amlodipine significantly antagonized the above effects of ox-LDL on EPC treated with 50 mg/L ox-LDL. Intracellular ROS content was significantly increased (P0.01), amlodipine significantly decreased intracellular ROS level (P0.05). Conclusion Amlodipine has a significant antagonistic effect on the formation of vascular like structure of EPC damaged by ox-LDL, which is related to the up-regulation of e NOS expression and the reduction of intracellular ROS level.
【作者单位】： 南华大学附属第一医院;南华大学心血管疾病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金项目(81070221) 江苏省博士后科研资助基金(1302095B) 湖南省卫生厅课题(B2013-034,B2011-054)资助
【分类号】：R965

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：2153428