apelin对脂多糖诱导的大鼠肺微血管内皮细胞凋亡和骨架改变的影响及机制

发布时间：2018-09-17 07:27

【摘要】：目的探讨apelin对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)凋亡、骨架改变的影响及作用机制。方法采用体外组织贴块法培养大鼠PMVEC,激光共聚焦显微镜观察LPS 10 mg·L~(-1)分别处理0,3,6,12,24和48 h PMVEC骨架结构的改变;另取PMVEC加入apelin 1和10 nmol·L~(-1)或p38抑制剂SB203580 10μmol·L~(-1)预处理,2 h后加入LPS 10 mg·L~(-1)作用24 h后,AnnexinⅤ/PI染色法检测大鼠PMVEC凋亡,Western蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白BAX和BCL-2的水平;同时还采用Western蛋白印迹法检测LPS 10 mg·L~(-1)作用0,5,15,30,60,120和240 min,或apelin 1和10 nmol·L~(-1)预处理2 h后加入LPS 10 mg·L~(-1)作用30 min后p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平的变化。结果激光共聚焦显微镜观察结果显示,LPS明显诱导了大鼠PMVEC骨架重排,apelin 1和10 nmol·L~(-1)预处理明显干预了LPS诱导的PMVEC应力纤维的形成和细胞骨架形态的改变。AnnexinⅤ/PI染色结果表明,apelin 1和10 nmol·L~(-1)预处理明显抑制了LPS诱导的大鼠PMVEC凋亡,早期凋亡率由(43.8±4.6)%分别降至(33.7±6.9)%和(11.2±3.0)%(P0.05),晚期凋亡率由(54.3±3.4)%分别降至(29.5±4.6)%和(9.0±1.6)%(P0.05),并不同程度地逆转了BAX和BCL-2的表达失衡情况(P0.05)。Western蛋白印迹结果显示,LPS作用5 min即明显诱导大鼠PMVEC中p38 MAPK磷酸化水平增高(P0.05),且在30 min时磷酸化水平达到最高(P0.01),apelin预处理明显抑制了LPS作用30 min诱导的p38 MAPK磷酸化水平的增高(P0.01)。p38抑制剂SB203580预处理明显抑制了LPS诱导的大鼠PMVEC凋亡,早期(36.7±3.8%)和晚期凋亡率(38.3±7.5%)分别降至(19.7±4.7)%和(15.7±3.6)%(P0.01)。结论 apelin明显干预了LPS诱导的大鼠PMVEC骨架蛋白重排以及凋亡损伤,这一保护作用与其抑制p38 MAPK信号通路有关。
[Abstract]:Objective to investigate the effect and mechanism of apelin on (PMVEC) apoptosis and cytoskeleton changes induced by lipopolysaccharide (LPS) in rat pulmonary microvascular endothelial cells. Methods PMVEC, laser scanning confocal microscopy was used to observe the changes of the skeleton structure of LPS 10 mg L ~ (-1) treated with 10 mg L ~ (-1) for 24 h and 48 h, respectively. PMVEC was pretreated with apelin 1 and 10 nmol L ~ (-1) or p38 inhibitor SB203580 10 渭 mol L ~ (-1) for 2 h, then LPS 10 mg L ~ (-1) was added for 24 h, then Annexin 鈪，

本文编号：2245160