地尔硫卓对血管紧张素Ⅱ所致内皮细胞损伤的保护作用及其机制研究

发布时间：2018-10-07 18:19

【摘要】：目的：探讨地尔硫卓(Diltiazem,Dil)对血管紧张素Ⅱ (Ang-Ⅱ)损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用及其可能的机制。 方法：体外培养人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs),用10-6M的Ang-II作为损伤因子模拟体外损伤模型,以氯沙坦(Losartan,LT)为阳性药物对照,观察Dil对Ang-Ⅱ损伤的HUVECs的保护作用及其保护作用是否与GHSRIa受体有关。细胞分组：(1)正常对照组；(2) Ang-Ⅱ (10-8M、10-7M、10-6M、10-5M)损伤组；(3) Dil (10-8M、10-7M、10-6M)+Ang-Ⅱ(10-6M)组;(4)[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)+Dil (10-6M)+Ang-Ⅱ(10-6M)组;(5) LT (10-6M)+Ang-Ⅱ (10-6M)组;(6) Dil(10-6M)组;(7)[D-Lys3]-GHRP-6(GHSRIa受体选择性阻断剂,25μM)组。细胞贴壁后,随机分组,加GHSRIa阻断剂[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)预孵育细胞30min,然后分别加入Dil (10-8M,10-7M、10-6M)及LT(10-6M)处理细胞30min,最后再加入Ang-Ⅱ (10-6M)处理细胞24h。MTT检测HUVECs田胞活力；流式细胞术检测HUVECs凋亡率及HUVECs中活性氧水平；比色法检测细胞培养上清液中NO含量和乳酸脱氢酶(Lactic dehydrogenase,LDH)活性；Real time PCR检测HUVECs中eNOS和p47phox mRNA表达；Western blot检测IUVECs中eNOS及p47phox蛋白表达。 结果： 1.各药物对细胞活力的影响：(1)与对照组相比较,Ang-Ⅱ(10-7M、10-5M)呈浓度依赖性及时间依赖性降低细胞活力(P0.05)；(2)与损伤组(10-6M)相比较,Dil呈浓度依赖性提高细胞活力(P0.05)。 2.各药物对细胞凋亡率的影响：(1)与对照组相比较,Ang-Ⅱ呈浓度依赖性增加HUVECs田胞凋亡率(P0.05);(2) Dil预处理细胞30min呈浓度依赖性降低细胞凋亡率(P0.05);(3)与Dil (10-6M)+Ang-Ⅱ (106M)组相比较,[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)预孵育细胞30min明显增加细胞凋亡率(P0.05)。 3.各药物对细胞产生活性氧的影响：(1)Dil预处理组浓度依赖性降低HUVECs中产生的活性氧(P0.05)；(2)与Dil(10-6M)+Ang-Ⅱ组相比较,[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)预孵育细胞30min,细胞活性氧水平显著升高(P0.05)。 4.各药物对细胞上清液中NO和LDH释放的影响：(1)Dil预处理组显著增加细胞上清液中NO含量(P0.05),降低LDH活性(P0.05)；(2)与Dil(10-6M)+Ang-Ⅱ组相比较,[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)预孵育细胞30min明显减少细胞上清液中NO含量,增加LDH活性(P0.05)。 5.各药物对细胞eNOS mRNA及其蛋白表达的影响：(1)Dil预处理组显著上调细胞eNOS mRNA及其蛋白表达水平(P0.05)。(2)与Dil (10-6M)+Ang-Ⅱ (10-6M)组相比较,[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)预孵育组明显下调细胞中eNOS mRNA及其蛋白表达水平(P0.05)。 6.各药物对细胞p47phox mRNA及其蛋白表达的影响：(1)Dil预处理组下调p47phox mRNA及其蛋白表达水平(P0.05)；(2)与Dil (10-6M)+Ang-Ⅱ (10-6M)组相比较,[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)预孵育细胞30min,显著上调细胞中p47phox mRNA及蛋白表达水平(P0.05)。 结论： (1)Dil对Ang-Ⅱ损伤的HUVECs具有保护作用,其保护作用可能与Dil抗氧化性和上调eNOS、NO有关； (2) GHSRIa阻断剂预孵育能够减弱Dil的抗氧化性及下调eNOS、NO； (3)Dil保护Ang-Ⅱ诱导损伤的HUVECs作用可能部分由GHSRIa受体介导。
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【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R96

【参考文献】

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本文编号：2255203