基于新型衍生化方法的UPLC-HRMS单克隆抗体N-糖基化分析方法

发布时间：2018-10-21 12:36

【摘要】：目的:为了满足单克隆抗体药物N-糖分析的实际需要,建立稳定、灵敏、可靠的单克隆抗体药物N-糖分析的分析方法。方法:采用全新的肼基衍生化试剂对N-糖进行衍生化,并对衍生化后的N-糖进行超高效液相色谱高分辨质谱分析。采用与开源数据库比对和多级质谱对检测到的N-糖进行初步定性。结果:新的肼基衍生化分析方法将单克隆抗体药物N-糖分析的灵敏度提高了2~3个数量级,与传统2-氨基苯甲酰胺(2-AB)衍生化相比,灵敏度也有3倍的提高。新的方法条件温和,保证N-糖结构的完整性,实现了多种不稳定唾液酸修饰N-糖的检出。二级质谱的应用提高了结构分析的效率与针对性。结论:本文建立了可靠、灵敏、高效的单克隆抗体药物N-糖分析方法,该方法在实际应用中具有极大的应用前景。
[Abstract]:Objective: to establish a stable, sensitive and reliable method for the analysis of monoclonal antibody drug N-sugar. Methods: N- sugar was derivatized by a novel hydrazinyl derivatization reagent, and the N- sugar was analyzed by high performance liquid chromatography and high resolution mass spectrometry. The detected N- sugar was preliminarily identified by comparison with open source database and multistage mass spectrometry. Results: the sensitivity of the monoclonal antibody N- sugar analysis was improved by 2 ~ 3 orders of magnitude by the new hydrazine derivatization method, which was 3 times higher than that of the traditional 2-aminobenzoamide (2-AB) derivatization. The condition of the new method is mild, and the integrity of N-sugar structure is guaranteed, and many unstable sialic acid modified N-sugar can be detected. The application of secondary mass spectrometry improves the efficiency and pertinence of structure analysis. Conclusion: a reliable, sensitive and effective method for the analysis of N-sugar was established.
【作者单位】： 中国医学科学院药物研究所;
【基金】：国家事业单位基本科研业务费(2014CX10) 自科基金项目(81402892)
【分类号】：R917

【共引文献】

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本文编号：2285109