新型拓扑异构酶抑制剂抗肿瘤活性及其机制研究

发布时间：2018-11-16 07:50

【摘要】：目的:研究两种新型拓扑酶抑制剂6-甲基- 11- (4-二甲基氨基苄烯)-7,8,9,10-四氢-1-氢吲哚[1,2-b]吲哒唑三氟甲磺酸盐(受试物1)和1-甲基- 5- (4-二甲氨基苄烯)-5H-茚[1,2-b]吡啶三氟甲磺酸盐(受试物2)体外抗肿瘤活性,并初步探讨其作用机制。 方法:采用MTT法检测两种受试物对人肿瘤细胞增殖的抑制作用;质粒pBR322解旋反应考察受试物对TopoⅠ催化活性的影响,Western blot法检测细胞中TopoⅠ和TopoⅡ的蛋白表达变化;Hoechst 33258荧光染色、AO荧光染色、单细胞凝胶电泳和流式细胞仪等方法观察两种受试物对HEp-2细胞凋亡和细胞周期的影响;Western blot法分析受试物导致HEp-2细胞死亡的机制。 结果:MTT法的结果显示受试物1和受试物2对9种人肿瘤细胞株均有显著的抗肿瘤活性,并呈现浓度依赖性;受试物1和受试物2分别在8μmol·L-1和4μmol·L-1时可抑制TopoⅠ介导的质粒DNA超螺旋的解旋,并且两种受试物都可下调细胞中TopoⅠ、Ⅱ的蛋白表达;Hoechst荧光染色表明受试物可诱导HEp-2细胞凋亡,AO染色也得到相同的结果;单细胞凝胶电泳检测出两种受试物导致DNA损伤;流式细胞仪检测的结果表明处理组的细胞凋亡率高于对照组,同时显示,受试物1使HEp-2细胞周期在S期和G2/M期发生阻滞,而受试物2使其阻滞在G1期;Western blot检测细胞凋亡及细胞周期相关蛋白,结果显示促凋亡蛋白Bid、Bax和JNK表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,细胞周期蛋白cyclin B1和cyclin D1表达减少 结论:本文实验表明,6-甲基- 11- (4-二甲基氨基苄烯)-7,8,9,10-四氢- 1-氢吲哚[1,2-b]吲哒唑三氟甲磺酸盐和1-甲基-5-(4-二甲氨基苄烯)-5H-茚[1,2-b]吡啶三氟甲磺酸盐可以抑制HEp-2细胞的生长,这可能与以下机制有关:①通过抑制TopoⅠ的催化活性并下调细胞中TopoⅠ和TopoⅡ的表达;②调控凋亡相关基因的表达,诱导其凋亡;③造成肿瘤细胞周期紊乱,促进凋亡。
[Abstract]:Objective: to study two novel topological enzyme inhibitors, 6-methyl-11- (4-dimethylaminobenzene) -7-, 9 / 10-tetrahydro-1-hydroindole-[ 1] indazolate-trifluoromethyl sulfonate (test 1) and 1-methyl-5- (4-dimethylaminobenzene) -5H-indene [1t2-b] pyridine trifluoromethyl sulfonate (subject) 2) Antitumor activity in vitro, The mechanism of its action was also discussed. Methods: MTT assay was used to detect the inhibitory effect of two kinds of samples on the proliferation of human tumor cells, and the effect of plasmid pBR322 unspin reaction on the catalytic activity of Topo 鈪，

本文编号：2334910