吖啶类衍生物MAPAT的抗肿瘤活性及其作用机制研究

发布时间：2018-12-06 16:03

【摘要】：目的：对本课题组合成的吖啶酰胺基硫脲类衍生物MAPAT(2-甲氧基-9-吖啶(吡啶酰胺基)硫脲)进行体外抗肿瘤活性筛选,初步探讨其抗肿瘤活性的作用机制。方法：1.采用CCK-8法测定MAPAT对人肺癌细胞株A549、人胰腺癌细胞株panc-1、人子宫癌细胞株Hela、人脑胶质瘤细胞株SN-K、人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞的增值抑制作用。2.HE染色法观察MAPAT作用后细胞形态的变化。3.透射电镜观察肿瘤细胞的亚显微结构变化。4.Annexin FITC/PI标记法检测细胞凋亡的影响。5.细胞周期实验分析DNA倍体变化。6.荧光定量PCR技术分析MAPAT对拓扑异构酶(TopoⅠ、Ⅱα、Ⅲβ) mRNA表达的影响。7.蛋白印迹法分析MAPAT对拓扑异构酶(TopoⅠ、Ⅱα、Ⅲβ)蛋白表达的影响。结果：1. CCK-8实验结果显示,MAPAT对体外培养的5种肿瘤细胞CNE-2、 panc-1、SN-K、A549以及Hela均有一定的抑制作用, MAPAT处理A549、CNE-2、panc-1、SN-K及Hel a细胞48h的ICso分别是(8.90±0.49)μmol/L、 (44.44±0.02)μmol/L、(133.54±0.87)μmol/L、(80.16±0.18)μmol/L、(92.77±0.12)μmol/L,其中对A549细胞的IC50最小,其IC50=8.90μmol/L,当26.77μmol/L时抑制率达到70%,故选取A549作为后续研究的细胞模型,设置低剂量组为4.45μmol/L、中剂量组为8.90μmol/L,高剂量组为26.77μmol/L。2.HE染色结果可见随着MAPAT的作用浓度增加,给药组细胞生长密度较对照组依次降低,细胞间隙增大,并可见细胞收缩体积变小,核固缩蓝色深染的凋亡形态学改变。3.透射电镜观察结果显示,MAPAT可诱导A549细胞的体积缩小、核固缩、染色质聚集的凋亡形态产生。细胞器空泡变形和细胞自噬,细胞器与细胞核的肿胀变形,使核膜受损,细胞变形坏死,细胞膜受损,细胞崩裂。4.细胞凋亡实验结果显示,MAPAT对人肺癌细胞株A549作用48h后,低、中、高剂量组的坏死率分别为(2.63+0.21)%、(2.70±1.19)%、(38.80-±0.10)%；与空白对照相比较,加药组随着MAPAT浓度增加,坏死率显著增加(P0.01)；低剂量组、中剂量组凋亡率逐渐增大(P0.05)。5.细胞周期实验结果,与空白对照组相比,MAPAT对A549细胞作用48小时后,S期及G2/M期细胞明显增加。6.荧光定量PCR和Western Blot实验结果显示,MAPAT作用于A549后,与空白对照组相比,上调Topo II a在mRNA及蛋白水平的表达,下调Topo Ⅰ、Topo Ⅱβ在mRNA及蛋白水平的表达。结论：吖啶类衍生物MAPAT可抑制CNE-2、panc-1、SN-K、A549和Hela细胞的细胞增殖,其中对A549的作用最显著；MAPAT对肿瘤细胞的抑制作用可能与影响细胞周期分布和诱导细胞凋亡有关；MAPAT抑制人肺癌A549细胞Topo Ⅰ、Topo Ⅱβ在mRNA及蛋白水平的表达,这有可能与MAPAT抑制A549细胞增值的作用机制有关。
[Abstract]:Aim: to screen the antitumor activity of acridine aminothiourea derivative MAPAT (2-methoxy-9-acridine (pyridyl) thiourea) in vitro and to explore the mechanism of its antitumor activity. Method 1: 1. CCK-8 assay was used to determine the effect of MAPAT on human lung cancer cell line A549 and human pancreatic cancer cell line panc-1, human uterine carcinoma cell line Hela, human glioma cell line SN-K, The proliferation inhibition of human nasopharyngeal carcinoma (NPC) cell line CNE-2 cells. The morphological changes of MAPAT cells after MAPAT treatment were observed by 2.HE staining. 3. The ultrastructural changes of tumor cells were observed by transmission electron microscope (TEM). The effect of apoptosis was detected by 4.Annexin FITC/PI labeling method. 5. 5. Cell cycle analysis of DNA ploidy. 6. The effect of MAPAT on the expression of topoisomerase (Topo 鈪，

本文编号：2366291