PARP-1体外活性测定方法的建立及其应用

发布时间：2019-01-04 12:50

【摘要】：建立PARP-1的体外活性测定方法并对84个具有潜在PARP抑制活性的化合物进行筛选。从Sf9昆虫细胞中提取酶液,以NAD+为底物,DNA为激活剂,建立PARP-1的活性测定方法;以高通量技术参数评价此方法,用已知PARP抑制剂进行验证,并以此方法进行PARP抑制剂的筛选。结果显示,确定的酶促反应体系为:12.5 nmol/L NAD+,15μg/m L DNA,6.25×10-4U PARP-1。评价Z'因子为0.76,S/B值为3.58。基于此模型筛出47个化合物在浓度7.4μmol/L时对PARP-1的抑制率达到60%以上。表明所建立的PARP-1活性测定方法,适用于PARP-1抑制剂的高通量筛选。
[Abstract]:To establish an in vitro assay for the activity of PARP-1 and to screen 84 compounds with potential PARP inhibitory activity. A method for determining the activity of Sf9 was established by extracting enzyme from Sf9 insect cells and using NAD as substrate and DNA as activator. The method was evaluated with high throughput technical parameters and verified by known PARP inhibitors. The method was used to screen PARP inhibitors. The results showed that the enzymatic reaction system was 12. 5 nmol/L NAD, 15 渭 g / mL DNA,6.25 脳 10 ~ (-4) U PARP-1.. The Z' factor was 0.76% S / B = 3.58. On the basis of this model, 47 compounds were found to have a inhibitory rate of over 60% on PARP-1 at the concentration of 7.4 渭 mol/L. The results showed that the established method for the determination of PARP-1 activity was suitable for high throughput screening of PARP-1 inhibitors.
【作者单位】： 江南大学药学院;
【分类号】：R965

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：2400316