新型双功能融合蛋白GAD的PEG-马来酰亚胺修饰及其性质研究

发布时间：2019-01-29 02:10

【摘要】：为了解决新型双功能融合蛋白GAD复性困难、具有免疫原性等问题,采用PEG-马来酰亚胺修饰变性后的GAD包涵体。通过圆二色谱、色氨酸荧光分析等方法对比修饰前后GAD构象变化,并采用OGTT、脂清除实验验证其生物学活性。研究结果表明,PEG-马来酰亚胺能够完成变性条件下GAD的定点修饰,提高其复性效率,且修饰产物二、三级结构与修饰前一致;PEG-GAD的免疫原性降低(P0.01),具有显著的降糖降脂作用(P0.001),且体内药效时间延长。此方法可为强疏水性多肽类药物的开发提供有效策略。
[Abstract]:In order to solve the problem of GAD renaturation and immunogenicity, PEG- maleimide was used to modify the GAD inclusion body after denaturation. The conformation changes of GAD before and after modification were compared by circular dichroism chromatography and tryptophan fluorescence analysis, and their biological activity was verified by OGTT, lipid scavenging experiment. The results showed that PEG- Maleimide could complete the fixed-point modification of GAD under denaturation conditions and improve its renaturation efficiency. The second and third order structure of the modified product was the same as that before modification. The immunogenicity of PEG-GAD was decreased (P0.01), the effect of glucose and lipid was significantly decreased (P0.001), and the time of drug effect in vivo was prolonged. This method can provide an effective strategy for the development of strong hydrophobic polypeptide drugs.
【作者单位】： 中国药科大学生命科学与技术学院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.81172974)~~
【分类号】：R914

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本文编号：2417536