用于阿糖鸟苷合成的腺苷脱氨酶在大肠埃希菌中的表达

发布时间：2019-04-20 14:50

【摘要】：铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa TX16)具有腺苷脱氨酶活性,可以催化2,6-二氨基嘌呤核苷脱氨合成阿糖鸟苷,但铜绿假单胞菌TX16是一种条件致病菌,直接用于工业生产存在一定风险。将铜绿假单胞菌TX16菌株来源的腺苷脱氨酶基因(add)克隆至载体p ET-28a中,然后转化至大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3),经过筛选获得工程菌E.coli(add)。经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测及酶活力测定,表明E.coli(add)能够表达大量腺苷脱氨酶,其产酶能力是含空载质粒的BL21(DE3)菌株E.coli(p ET-28a)的16.2倍。以E.coli(add)制备的粗酶液为催化剂,催化阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷发生脱氨反应得到产物阿糖鸟苷,转化率可达96.8%。
[Abstract]:Pseudomonas aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa TX16 has adenosine deaminase activity and can catalyze the deamination of 2,6-diamine nucleoside to Ara-guanosine. However, Pseudomonas aeruginosa TX16 is a conditional pathogen, and there is a certain risk for direct use in industrial production. The adenosine deaminase gene (add) from Pseudomonas aeruginosa TX16 strain was cloned into vector p ET-28a and transformed into E. coli Escherichia coli BL21 (DE3). After screening, the engineering strain E.coli (add). Was obtained. The results of isopropyl-尾-D-thiopyranopyranoside (IPTG) induction, polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and enzyme activity assay showed that E.coli (add) could express a large amount of adenosine deaminase. The enzyme production ability of BL21 (DE3) strain E.coli (p ET-28a) was 16.2 times higher than that of E.coli (p ET-28a) containing empty plasmid. The crude enzyme solution prepared by E.coli (add) was used as catalyst to catalyze the deammoniation reaction of 2, 6-diamine nucleoside to produce arabinoside. The conversion rate was up to 96.8%.
【作者单位】： 河南师范大学生命科学学院功能微生物绿色转化技术河南省工程实验室;新乡拓新生化科技有限公司;
【基金】：河南省高校科技创新团队支持计划(13IRTSTHN009) 河南省教育厅自然科学基金项目(2011B180032)
【分类号】：R915

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本文编号：2461702