复方多组分内耳给药新模式：纳米粒及纳米粒—温敏凝胶双相释药系统的研究

发布时间：2019-05-15 01:58

【摘要】：世界卫生组织2013年报告称,全球有3.6亿人患有听力残疾,占全球总人口的5.3%。对于70岁及以上的人群,近三分之二患有老年性聋疾病。这可能会导致社会孤立和主要的沟通障碍,严重影响患者的正常生活。经鼓室注射(IT)的局部治疗方式已成为目前治疗内耳疾病的新方法之一,其可以减小用药剂量与药物的不良反应,且便捷、安全和微创,但由于中耳腔的容积较大且存在咽鼓管这一自然泻出通道,实际与圆窗膜接触,以及经由圆窗膜扩散进入内耳的药物总量十分有限或并不十分确切。温敏原位凝胶能随环境温度改变而发生一定的相变。可实现注射植入和长期释药,广泛应用于眼部给药、鼻部给药以及注射给药,在药学领域中发挥着重要的作用,成为近年来的研究热点。药物在温敏凝胶剂中的缓释特征明显,有望成为一种新型的内耳局部给药系统。随着温敏凝胶研究的不断深入,已有研究将温敏凝胶和纳米粒、脂质体和微球等结合起来,使所得到的复合给药系统可以充分发挥两者的优势,克服单一制剂的不足,提高药物的溶解度和稳定性,达到更好的缓、控释效果。丹参、三七是中国传统古方常用的中药药对之一,均有活血化瘀理气止痛之功效,配伍后相须互补,广泛用于治疗突发性耳聋及噪声性听力损伤等内耳疾病。本课题以丹参-三七复方有效组分三七皂苷R_1(R_1)、人参皂苷Rg_1(Rg_1)、人参皂苷Rb_1(Rb_1)、丹酚酸B(Sal B)和丹参酮IIA(Ts IIA)作为模型药物,以生物相容性好的PLGA为药物载体,采用复乳-溶剂挥发法(W/O/W)制备PLGA纳米粒,且以纳米粒的粒径、粒径分布(PDI)、包封率和载药量为评价指标,采用单因素法进行处方优化。为提高丹参酮IIA(TS IIA)的溶解度,采用旋蒸法制备丹参酮IIA的羟丙基-β-环糊精包合物(TS IIA-HP-β-CyD),与PLGA纳米粒共孵育,制备成核-壳型丹参酮IIA-羟丙基-β-环糊精包合物-PLGA纳米粒(HP-β-CyD-PLGA NPs)。激光粒度仪测得HP-β-CyD-PLGA NPs的平均粒径为234.12±4.83 nm,PDI为0.12±0.02,Zeta电位为44.42±4.13 mV。超滤离心法测定各组分R_1、Rg_1、Rb_1、Sal B和TS IIA的包封率分别为:78.97±6.39%,85.22±5.95%,85.64±8.23%,76.59±9.19%和94.70±2.56%;载药量分别为:0.37±7.24%,0.27±5.86%,0.54±9.12%,0.33±12.39%和0.23±8.34%。透射电镜(TEM)显示HP-β-CyD-PLGA NPs具有明显的核壳结构,为较圆整的球形且分布均一。采用透析袋法研究HP-β-CyD-PLGA NP s的体外释药,释药曲线方程拟合结果表明R_1、Rb_1和Sal B的释药过程符合一级释放动力学模型,Rg_1的释药过程符合Higuchi模型,TS IIA的释药过程符合Ritger-Peppas模型。分别选用泊洛沙姆和壳聚糖为温敏凝胶主要基质材料,将HP-β-CyD-PLGA NPs分散于两种温敏凝胶中,形成纳米粒-凝胶双相释药系统。试管倒置法显示载纳米粒的两种温敏凝胶在37℃均具有良好的温敏性能。载纳米粒的泊洛沙姆凝胶(HP-β-CyD-PLGA-NPs-P-gel)体外释药研究表明,各成分释放均呈现显著地缓释效应,R_1、Rb_1及TS IIA的释放符合Ritger-Peppas模型,Rg_1和Sal B的释放符合Higuchi模型,释放机制均是溶蚀和扩散的共同作用。扫描电镜显示载纳米粒的壳聚糖凝胶(HP-β-CyD-PLGA-NPs-CS/GP-gel)内部呈三维网状结构,且成功包载纳米粒。体外释放研究表明HP-β-CyD-PLGA-NPs-CS/GP-gel中各组分释放也都符合溶蚀-扩散动力学模型,Rg_1的释放符合Higuchi模型,其余四中成分均符合Ritger-Peppas模型。此外,在溶菌酶存在的PBS溶液中,凝胶具有良好的降解性能。在豚鼠实验中,考察了共载罗丹明B和香豆素6荧光素的纳米粒(C-6-HP-β-CyD-R-B-PLGA NPs)、纳米粒-泊洛沙姆凝胶(C-6-HP-β-CyD-R-BPLGA-NPs-P-gel)及纳米粒-壳聚糖凝胶(C-6-HP-β-CyD-R-B-PLGA-NPs-CS/GP-gel)在耳蜗Corti器(OC)、螺旋神经节细胞(SGNs)和血管纹(SV)的分布情况,同时也考察了丹参-三七复方组分各给药系统经豚鼠鼓室注射在内耳外淋巴中(PL)的药物分布及药动学研究。结果表明,纳米粒、纳米粒-泊洛沙姆凝胶及纳米粒-壳聚糖凝胶给药系统均能成功地将药物递送进入耳蜗PL,且在OC、SGNs及SV均有分布。纳米粒-凝胶复合给药系统能够延长药物的释放时间达96 h,同时药动学参数显示其能够延长药物在豚鼠PL中的平均滞留时间(MRT),以及提高TS IIA的生物利用度(AUC)。综上所述,复方组分纳米粒-凝胶双相释药系统兼具纳米粒与凝胶的性质,以液体的形式经鼓室给药后,可在中耳腔内发生相转变,形成半固体凝胶,使药物与圆窗膜的接触时间延长,达到缓释效果,提高局部生物利用度,从而减少给药次数、克服液体制剂需多次给药的缺陷,是极具临床应用潜力的内耳局部缓释给药新模式。
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【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R943

【参考文献】