氨溴索对伏立康唑和美罗培南在小鼠肺组织分布的影响及其口服与雾化药动学的比较

发布时间：2019-05-19 06:28

【摘要】：第一部分不同剂量盐酸氨溴索对伏立康唑在小鼠血浆及肺组织中分布的影响目的:建立小鼠血浆及肺组织中伏立康唑的HPLC测定方法,通过比较低、中、高三种不同剂量盐酸氨溴索与伏立康唑联用后,伏立康唑在小鼠血浆及肺组织中药动学参数的变化,考察不同剂量盐酸氨溴索对伏立康唑在小鼠血浆及肺组织中分布的影响。方法:色谱条件:色谱柱为Diamonsil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.01mol·L~(-1)磷酸二氢钾(三乙胺调p H至6.26)(47:53),流速1.0 m L·min~(-1),柱温30℃,检测波长为254 nm,进样量10μL,内标为盐酸地尔硫?。将240只健康昆明雄性小鼠,随机分为对照组和实验组,其中实验组包括低、中、高3个剂量组。对照组灌胃给予伏立康唑66.67mg·kg~(-1),各实验组则灌胃给予等量伏立康唑与不同剂量盐酸氨溴索(分别为10 mg·kg~(-1)、50 mg·kg~(-1)和150 mg·kg~(-1))。四组小鼠分别在给药后不同时间点摘眼球取血,离心后得血浆样品。将其肺部组织,充分研磨后离心,取上清液得肺组织匀浆样品。血浆样品采用乙腈沉淀蛋白法处理,肺组织匀浆样品则采用乙酸乙酯-二氯甲烷(75:25)萃取。应用DAS 2.1.1软件拟合药动学参数,SPSS 21.0软件进行统计学分析。结果:经方法学验证,血浆及肺组织中伏立康唑在各自线性范围内线性关系良好,标准曲线分别为Y_1=0.043 X_1-0.012(r=0.9996)(2~64μg·m L~(-1))与Y_2=0.303 X_2+0.119(r=0.9992)(0.4~12.8μg·m L~(-1));平均回收率分别为83.59%~94.80%和73.12%~77.67%;日内、日间精密度RSD值均小于15%;反复冻融3次、低温保存20天及处理后室温放置8 h,样品均稳定,对其测定无影响。血浆及肺组织中伏立康唑的主要药动学参数AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)、t_(1/2)、T_(max)、CL、V、C_(max)在四组间均无显著差异(P0.05)。结论:本法专属性好,灵敏度、准确性与回收率较高,可用于小鼠血浆及肺组织中伏立康唑浓度的测定。不同剂量盐酸氨溴索与伏立康唑合用后对伏立康唑在小鼠血浆及肺组织中分布均无影响。第二部分不同剂量盐酸氨溴索对美罗培南在小鼠肺组织中分布的影响目的:采用液相色谱-质谱串联技术(LC-MS/MS),建立测定小鼠肺组织中美罗培南含量的方法,并探讨不同剂量盐酸氨溴索与美罗培南联合用药时,盐酸氨溴索对美罗培南在小鼠肺部分布的影响。方法:Diamonsil C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱进行分离,流动相为乙腈-0.1%甲酸水,梯度洗脱,流速1.0 m L·min~(-1),内标为厄他培南。电喷雾离子化源(ESI),正负离子切换。多反应监测(MRM)方式进行定量分析,用于定量分析的离子对分别为美罗培南m/z 384.1→141.2,内标厄他培南m/z 474.4→265.2。将144只小鼠随机分为对照组、低剂量组与高剂量组。低、高剂量组尾静脉给予不同剂量盐酸氨溴索,对照组则给予等量生理盐水,而后三组实验动物均尾静脉给予等量美罗培南。于给药后不同时间点摘眼球放血,并取肺组织制备组织匀浆样品。采用LC-MS/MS法测定肺组织中美罗培南的浓度,应用DAS 2.1.1软件拟合药动学参数,SPSS 21.0软件进行统计学分析。结果:小鼠肺组织中美罗培南在标线范围内呈良好线性关系,回归方程为Y=0.01507 X+0.01348(r=0.9997)(15.625~2000 ng·m L~(-1));平均回收率为98.05%~102.5%;基质效应为90.93%~104.3%;同时,经验证精密度、稳定性、稀释效应等均符合生物样品测定要求。药动学实验结果表明,三组间的药动学参数AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)、t_(1/2)、T_(max)、CL、V、C_(max)均无显著性差异(P0.05)。结论:本实验建立高效液相色谱-质谱串联法测定小鼠肺内美罗培南含量的方法,操作简便,分析时间较短,准确度高,专属性良好。可用于测定肺组织中美罗培南的含量。实验结果表明,不同剂量盐酸氨溴索与美罗培南合用后,对小鼠肺组织中美罗培南分布无影响。第三部分盐酸氨溴索口服与雾化吸入在小鼠肺组织中的药动学比较目的:采用LC-MS/MS技术,建立测定小鼠血浆及肺内盐酸氨溴索含量的方法。同时,考察盐酸氨溴索口服与雾化吸入不同给药途径在小鼠血浆及肺部药动学。方法:Diamonsil C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱进行分离,流动相为乙腈-5 mmol·L~(-1)乙酸铵(0.1%甲酸)(37:64),流速1.0 m L·min~(-1),柱温35℃,内标为磺胺甲VA唑。电喷雾离子化源(ESI),正离子监测。多反应监测(MRM)方式进行定量分析,用于定量分析的离子对分别为盐酸氨溴索m/z 379→263.7,内标磺胺甲VA唑m/z 254.2→155.8。144只昆明小鼠随机分为对照组与实验组,每组72只。对照组采用口服灌胃方式,实验组采用雾化吸入给药方式,两组实验动物均给予小鼠等量盐酸氨溴索(4.5 mg·kg~(-1))。于给药后不同时间点摘眼球取血,离心后得血浆样品。取其肺组织制备肺组织匀浆样品。血浆与肺组织匀浆样品均采用乙腈沉淀蛋白法处理。采用DAS 2.1.1软件拟合药动学参数,SPSS 21.0软件进行统计学分析。结果:口服给药后,小鼠血浆及肺组织中C_(max)值分别为138.57±52.21、361.48±103.54 ng·m L~(-1),AUC_(0-∞)值分别为741.05±136.90、1482.41±427.25ng·h·m L~(-1);雾化给药后,C_(max)值分别为7419.67±3224.4、3415.33±941.94ng·m L~(-1),AUC_(0-∞)值分别为10113.16±2032.61、10153.26±1439.80 ng·h·m L~(-1)。血浆及肺内C_(max)值与AUC_(0-∞)值在两组间均有显著性差异(P0.05)。结论:本实验建立了LC-MS/MS法测定小鼠血浆及肺内盐酸氨溴索含量的方法。药动学结果表明,雾化给药后,盐酸氨溴索可在血浆及肺内达到较高浓度,提示雾化给药方式可能更有利于肺部疾病的治疗。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R965

【参考文献】