不同药物对实验性结肠炎大鼠肠上皮细胞凋亡和增殖的影响

发布时间：2019-08-07 10:48

【摘要】：目的：研究蒙脱石散、美沙拉秦及美沙拉秦联合蒙脱石散对TNBS诱导的实验性UC大鼠肠上皮细胞凋亡和增殖的影响,探讨两种药物治疗或联合治疗对实验性UC大鼠受损伤肠粘膜的修复作用及其机制。方法：将82只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、蒙脱石散组、美沙拉秦组、美沙拉秦联合蒙脱石散组,正常组10只,其余各组每组18只。除正常组大鼠外,其他组通过TNBS/乙醇法建立实验性UC大鼠模型。造模24小时后随机抽取两只大鼠解剖,观察结肠组织病理变化,并另随机抽取8只大鼠注射99TcmN核诺氟沙星氨荒酸盐配合物(99TcmN(NFXDTC)2),行SPECT全身显像,来明确炎症存在和确认模型的建立。模型建立成功后,按大鼠体表面积折算药量,每日灌服相应剂量生理盐水、美沙拉秦、蒙脱石散、美沙拉秦间隔两小时后蒙脱石散。于治疗满5天后处死一半大鼠,剩余大鼠治疗满12天后全部处死,收集大鼠的结肠标本。采用TUNEL法测定细胞凋亡率,采用免疫组织化学方法检测VEGF、PCNA表达阳性细胞率,采用荧光定量PCR检测肠组织中VEGF和PCNA两个基因表达情况。结果：1.模型建立成功：造模满24小时后大鼠出现腹泻、血便、体重下降。结肠组织行HE染色观察可见粘膜缺血、坏死,溃疡形成面积大,粘膜下层水肿,伴有中性粒细胞浸润,肌层亦有散在中性粒细胞。腺体结构破坏,杯状细胞减少。SPECT显像示肠道炎症存在。2.肠组织细胞凋亡的检测结果：治疗5天及12天的模型组和三个干预组与正常组相比,肠上皮细胞凋亡率明显增加(P=0.000)；给药治疗5天的三个干预组分别与治疗5天的模型组比较,肠上皮细胞凋亡率明显降低(P=0.000)；三组干预组间两两比较,美沙拉秦联合蒙脱石散组的凋亡率明显低于蒙脱石散组和美沙拉秦组(P=0.000),但蒙脱石散组与美沙拉秦组相比(P=0.347)；给药治疗12天的三个干预组分别与治疗12天的模型组比较,肠上皮细胞凋亡率明显降低(P=0.000)；三组干预组间两两比较,美沙拉秦联合蒙脱石散组的凋亡率明显低于美沙拉秦组,美沙拉秦组明显低于蒙脱石散组(P=0.000)；各干预组治疗12天的凋亡率与本组治疗5天的凋亡率相比明显减少(P=0.000)。3.免疫组化检测肠组织PCN及、EGF表达的检测结果：①PCNA：治疗5天及12天的模型组与正常组相比,肠组织中PCNA明显降低(P=0.000)；治疗5天及12天的四个干预组与正常组相比,治疗5天及12天美沙拉秦联合蒙脱石散组肠组织中PCNA的阳性表达与正常组比较(5天P=0.222,12天P=0.133)；治疗5天及12天的蒙脱石散组和美沙拉秦组与正常组相比(P0.05)；给药治疗5天的三个干预组分别与治疗5天的模型组比较,肠组织中PCNA的阳性表达率明显升高(P=0.000)；三组干预组间两两比较,治疗5天的各干预组比较(P0.05)；给药治疗12天的三个干预组分别与治疗12天的模型组比较,肠组织中PCNA的阳性表达率明显升高(P=0.000)；三组干预组间两两比较,治疗12天的各干预组比较(P0.05)；蒙脱石散组治疗12天的PCNA阳性表达率与本组治疗5天的PCNA阳性表达率相比明显增加(P=0.044),美沙拉秦及美沙拉秦联合蒙脱石散组治疗5天与治疗12天PCNA的阳性表达率比较无差异(P0.05)。②VEGF:治疗5天及12天的模型组与正常组相比,肠组织中VEGF明显增高(P=0.000)；治疗5天及12天的四个干预组与正常组相比,治疗5天及12天美沙拉秦联合蒙脱石散组肠组织中VEGF的阳性表达率与正常组比较(5天P=0.739,12天P=0.746)；治疗5天及12天的蒙脱石散组和美沙拉秦组与正常组相比(P0.05)；给药治疗5天的三个干预组分别与治疗5天的模型组比较,肠组织中VEGF的阳性表达率明显降低(P=0.000)；三组干预组间两两比较,美沙拉秦联合蒙脱石散组的VEGF阳性表达率明显低于美沙拉秦组,美沙拉秦组明显低于蒙脱石散组(P=0.000)；给药治疗12天的三个干预组分别与治疗12天的模型组比较,肠组织中VEGF阳性表达率明显降低(P0.05)；三组干预组间两两比较,美沙拉秦联合蒙脱石散组的VEGF阳性表达率明显低于美沙拉秦组,美沙拉秦组明显低于蒙脱石散组(P0.05)；蒙脱石散组治疗12天的VEGF阳性表达率与本组治疗5天的VEGF阳性表达率相比明显降低(P=0.006),美沙拉秦及美沙拉秦联合蒙脱石散组治疗5天与治疗12天VEGF阳性表达率比较(P0.05)。4.荧光定量PCR检测肠组织中VEGF和PCNA基因表达的检测结果：①PCNA：模型组与正常组相比,肠组织中PCNA明显降低(P=0.047)；正常组与蒙脱石散组、美沙拉秦组、美沙拉秦联合蒙脱石散组相比(P0.05)；三个干预组分别与模型组相比(P0.05)；三组干预组间两两比较(P0.05)：②VEGF:模型组与正常组相比,肠组织中VEGF明显增高(P=0.002)；正常组与蒙脱石散组、美沙拉秦组、美沙拉秦联合蒙脱石散组相比(P0.05)；三个干预组分别与模型组相比,差异均无统计学意义(P0.05)；三组干预组间两两比较,蒙脱石散组与美沙拉秦组VEGF相比(P=0.556)；蒙脱石散组及美沙拉秦组与美沙拉秦联合蒙脱石散组相比(P0.05)。结论：1.通过光镜下观察结肠病理变化及SPECT显像证实TNBS/乙醇法可以建立经典实验性UC大鼠模型。2.实验表明肠上皮细胞凋亡参与了UC的发病过程,蒙脱石散与美沙拉秦联合治疗能抑制细胞凋亡、促进细胞增殖,蒙脱石散能辅助美沙拉秦降低肠粘膜及血管通透性,效果优于单独使用美沙拉秦。3.本实验中,单独药物或联合药物治疗12天的效果均优于治疗5天的效果。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R965

【参考文献】