组胺H1受体拮抗剂高通量筛选模型的建立及应用

发布时间：2019-08-17 14:52

【摘要】：组胺H1受体拮抗剂被用于治疗某些过敏性疾病,如鼻炎、荨麻疹和过敏性皮炎。本文采用无标记细胞整合药理学技术建立了组胺H1受体拮抗剂高通量筛选模型。应用基于共振波导光栅的动态质量重置分析方法检测了已知的激动剂和拮抗剂作用于A431细胞上内源性H1受体后所产生的特征信号,获取特征信号谱,建立组胺H1受体拮抗剂筛选模型。进而应用此模型筛选了32个天然产物对组胺H1受体的拮抗活性。结果表明,无标记DMR分析适合于H1受体拮抗剂的高通量筛选;在筛选的32个化合物中,从亚贡中分离得到的内酯类化合物为活性较强的拮抗剂。上述结果表明,无标记DMR分析可能成为组胺H1受体拮抗剂发现的新方法。
【图文】：

M，2倍稀释，19个浓度梯度)分别加入已接种A-431细胞的Epic湟384孔生物感应器微型板中，在Epic湟系统上监测30min，得化合物DMＲ响应曲线。第二步:加入同一浓度组胺后继续监测30min，得组胺DMＲ响应曲线。2．1．1组胺H1受体激动剂引起的DMＲ响应信号组胺在A-431细胞上能够引起DMＲ响应信号，且呈剂量依赖性，，EC50为1．29μM;以不同浓度的组胺预处理后再加入同一浓度的组胺，组胺的DMＲ响应信号被抑制，预处理时组胺的浓度越高第二步组胺的DMＲ响应信号被抑制的越明显，呈剂量依赖性，IC50为0．59μM(图1)。这说明A-431细胞上3002001000Response(pm)-8%-7%-6%-5%-4%-3Histamine,log%MHistamineHistamine鄄Histamine(8%μm)图1组胺引起的DMＲ信号的量效关系曲线;组胺预处剂量与8μM组胺引起的DMＲ信号的量效关系曲线Fig.1TherelationshipofdoseandDMＲresponseofhista-mine;therelationshipofpretreatmentdoseofhista-mineandDMＲresponseof8μMhistamineVol.29史丽颖等:组胺H1受体拮抗剂高通量筛选模型的建立及应用469

存在组胺受体，组胺与受体结合后引起DMＲ信号响应，且再次加入组胺后，组胺的激动作用被脱敏。2．1．2组胺H1受体拮抗剂引起的DMＲ响应信号阿司咪唑、氯雷他定为组胺H1受体拮抗剂，以不同浓度的阿司咪唑或氯雷他定处理A-431细胞后，再加入16μM组胺(EC80)，组胺引起的DMＲ响应信号被抑制，且拮抗剂的浓度越高抑制越强，呈剂量依赖性，两种拮抗剂的抑制活性阿司咪唑(IC50=0．01μM)强于氯雷他定(IC50=0．18μM)，见图2。3002001000Response(pm)-12%-10Compound,log%MHistamineHistamine鄄Histamine(8%μm)-8%-6%-4图2组胺H1受体拮抗剂预处剂量与16μM组胺引起的DMＲ信号的量效关系曲线Fig.2TherelationshipofpretreatmentdoseofH1Ｒantago-nistsandDMＲresponseof16μMhistamineA-431细胞天然高表达组胺H1-4受体中的H1受体［12］，因此上述结果提示采用无标记细胞靶点药理学技术可以成功监测组胺激动A-431细胞上H1受体所引起的DMＲ响应信号、组胺被组胺受体激动剂脱敏的DMＲ响应信号和组胺被组胺受体拮抗剂所拮抗的DMＲ响应信号。由此成功建立组胺H1受体拮抗剂筛选方法:首先监测待筛选化合物预处理A-431细胞所引起的DMＲ响应信号，如果待测化合物不引起DMＲ响应信号，则继续加入组胺监测组胺所引起的DMＲ响应信号被待测化合物拮抗的程度，判断待测化合物对组胺H1受体的拮抗活性。2．2组胺H1受体拮抗剂高通量筛选模型的应用2．2．1待测化合物的组胺H1受体拮抗活性筛选采用无标记细胞靶点药理学筛选技术对32个待测化合物的组胺H1受体拮抗活性进行了筛眩首先，将10μL待测化合物(最高工作浓度64μM，2倍稀释，2个浓度梯度)加入已接种A-431细胞的Epic湟384孔生物感应?
【作者单位】： 大连大学药物研究所;辽宁中医药大学;中国科学院大连化学物理研究所;
【基金】：国家自然科学基金(81473436,31270398)
【分类号】：R96

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本文编号：2527856