葫芦素E引发细胞内质网应激的初步研究

发布时间：2019-09-17 15:01

【摘要】：目的:以可分裂的GFP蛋白作为基础,本研究了建立荧光蛋白系统,模拟细胞内蛋白降解的途径。利用此系统筛选了可能对ER产生作用的药物,并对这些药物做出基本检测,确定其确实的抗肿瘤作用。同时通过另外一种检测方式,来证实此系统筛选药物的可行性。从而为以后药物性质的检测提供可行的简单途径。方法:利用限制性酶切,我们将可分裂的GFP蛋白S-1端连接在表达错误折叠蛋白的质粒上,再转染至细胞,同时将S-10端转入细胞中,使其在细胞质中稳定表达。先用蛋白酶抑制剂(MG132)阻断持续表达错误蛋白的荧光细胞的蛋白降解途径,细胞的荧光值会持续增加。继而再加入筛选药物,通过6小时的处理后,测定荧光值,通过荧光值的改变可确定通过对ER作用的抗肿瘤药物。WB确定药物确实对ER-stress的影响。从筛选的药物中任一选取一种,流式细胞术确定其诱导肿瘤细胞凋亡。将表达错误折叠蛋白的质粒转入细胞中,同时加入蛋白合成抑制剂及筛选药物,WB测定错误折叠蛋白的表达,以确定药物可使错误折叠蛋白被阻断至ER中,通过加大ER负荷而导致ER-stress。结果:运用本研究前期建立的荧光细胞系统,筛选出了11种化合物或自然衍生物药物,其对于荧光值的影响都≥50%,并且荧光值的改变与药物的浓度成正相关。通过WB可确定此11种药物均可对ER-stress相关蛋白产生影响。对于随机选取的药物CuE,流式细胞术结果证明CuE确实可诱导细胞凋亡,并且与浓度也呈正相关。转染表达错误蛋白的质粒后WB的结果证实被筛选药物阻断错误表达的蛋白排出ER,以导致ER负荷加重,且与浓度呈正相关。结论:本实验建立了一个方便快捷的系统,用以筛选通过诱导ER-stress而导致肿瘤细胞凋亡的药物。为研究药物的抗肿瘤机制提供了简单的思路和方式。
【图文】：

（10 μM）、D5（5 μM）和 D5（2 μM）的药物可以将荧光比值降低 50%，说明本研究所用药物可能通过阻止内质网 split 绿色荧光蛋白转运到细胞浆。

本研究所用药物可能通过阻止内质网 split 绿色荧光蛋白转运到细胞浆。图 1. 多种药物可以将荧光比值降低 50%，作为后续实验候选药物。进一步，我们设定了其中 10 中药物进行下一步检测，终浓度初步定为 2 μM。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96

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本文编号：2536930