镉上调RAW264.7细胞MIP-2和COX-2表达的分子机制

发布时间：2019-10-17 06:17

【摘要】：目的越来越多的证据表明镉可诱导炎症，但其机制尚未明确。本文研究氯化镉（CdCl2）对RAW264.7细胞巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）和环氧合酶2（COX-2）表达的调控作用，探讨PTEN介导的PI3K/Akt信号通路在镉调控MIP-2和COX-2表达中的作用。 方法（1）给予CdCl2（50.0μM）刺激RAW264.7细胞不同时间（4和8hr），或给予不同浓度CdCl2（0、6.25、12.5、25.0和50.0μM）刺激RAW264.7细胞8hr，检测细胞因子/趋化因子mRNA表达。（2）给予不同浓度CdCl2（0、6.25、12.5、25.0和50.0μM）刺激RAW264.7细胞8hr或给予CdCl2（50.0μM）刺激RAW264.7细胞不同时间（1、4和8hr），检测Akt和pAkt蛋白水平。单纯给予CdCl2（50.0μM）刺激RAW264.7细胞8小时或选用磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）特异性抑制剂LY294002（50.0μM）进行预处理后给予CdCl2刺激细胞，检测Akt、pAkt和COX-2蛋白水平以及Mip-2和Cox-2mRNA水平。（3）给予不同浓度的CdCl2（0、6.25、12.5、25.0和50.0μM）刺激RAW264.7细胞8hr或给予CdCl2（50.0μM）刺激RAW264.7细胞不同时间（1、4和8hr），检测PTEN蛋白水平。单纯给予CdCl2（50.0μM）刺激RAW264.7细胞8hr或选用蛋白酶体特异性抑制剂MG132（20.0μM）进行预处理后给予CdCl2刺激细胞，检测细胞中Akt、pAkt和PTEN蛋白水平。（4）给予不同浓度CdCl2（0、12.5、25.0和50.0μM）刺激RAW264.7细胞8hr，检测PTEN蛋白泛素化水平。（5）选用还原型谷胱甘肽（GSH）前体物N-乙酰半胱氨酸（NAC，4.0mM）或GSH合成抑制剂丁硫氨酸-亚砜亚胺（BSO，1.0mM）进行预处理后给予CdCl2刺激细胞，检测细胞Akt、pAkt和PTEN蛋白水平。（6）选用抗氧化剂N-叔丁基-α-苯基硝酮（PBN，4.0mM）或维生素C（100μM）进行预处理后给予CdCl2刺激细胞，，检测Akt、pAkt和PTEN蛋白水平。 结果（1）CdCl2选择性诱导RAW264.7细胞Mip-2和Cox-2mRNA表达。（2）CdCl2能够明显提高Akt磷酸化水平，并呈浓度-效应和时间-效应关系；LY294002抑制CdCl2引起的Akt磷酸化；LY294002显著抑制CdCl2诱导RAW264.7细胞MIP-2和COX-2上调。（3）CdCl2处理明显降低RAW264.7细胞PTEN蛋白水平。（4）RAW264.7细胞中CdCl2处理引起PTEN蛋白泛素化，蛋白酶体抑制剂MG132阻断CdCl2引起的PTEN蛋白降低，提示PTEN蛋白下降与PTEN蛋白泛素化有关。（5）NAC抑制CdCl2引起的PTEN降解和Akt磷酸化；BSO加剧CdCl2引起的PTEN降解和Akt磷酸化。（6）PBN及维生素C分别对CdCl2引起的PTEN降解和Akt磷酸化无抑制效应。 结论（本研究发现，镉显著提高RAW264.7细胞MIP-2和COX-2表达。同时，我们发现，镉上调RAW264.7细胞MIP-2和COX-2表达可能与PI3K/Akt信号激活有关。此外，蛋白酶体介导的PTEN降解参与镉激活RAW264.7细胞PI3K/Akt信号，且GSH耗竭可能是介导镉引起PTEN降解及其随后PI3K/Akt信号激活的重要原因。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R99

【参考文献】

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1 JELENA STOSIC;IVANA MIRKOV;SANDRA BELIJ;MIROSLAV NIKOLIC;ALEKSANDRA POPOV;DRAGAN KATARANOVSKI;MILENA KATARANOVSKI;;Gender Differences in Pulmonary Inflammation Following Systemic Cadmium Administration in Rats[J];Biomedical and Environmental Sciences;2010年04期

本文编号：2550417