依硫磷酸促进Dami细胞分化的初步研究
发布时间:2019-11-26 02:20
【摘要】:背景:依硫磷酸(通用名:氨磷汀)是一种泛细胞保护剂,临床主要用于肿瘤放疗或细胞毒化疗的脏器保护。基础研究发现依硫磷酸还具有其他作用,包括类造血生长因子、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制细胞周期进程等,然而,这些作用并不能用经典的碱性磷酸酶途径解释,说明依硫磷酸还有其他作用途径。我们前期临床研究发现,以依硫磷酸为主的联合方案治疗慢性ITP及MDS患者,获得血象改善,且ITP患者骨髓巨核细胞的成熟障碍减轻,但机制并不清楚。我们应用生物信息学分析发现依硫磷酸可能具有调控细胞分化的作用,本研究拟以人巨核细胞白血病Dami细胞系为对象,观察依硫磷酸促进Dami细胞向成熟巨核细胞分化的作用,为前期临床研究提供理论依据。 方法:生物信息学预测依硫磷酸是否具有调控细胞分化的作用;细胞计数法检测依硫磷酸对Dami细胞增殖的影响,,筛选依硫磷酸促进Dami细胞分化的合适浓度;流式细胞仪检测CD33、CD34、CD41a的表达,鉴定Dami细胞所处的分化阶段;Giemsa染色显示细胞核,倒置显微镜、透射电镜观察依硫磷酸(0.1mmol/L处理0、4、8、12天)对Dami细胞形态学的影响;流式细胞仪检测DNA倍体化及细胞膜CD41a、CD33表达的变化。Q-PCR和Western blot检测转录因子GATA-1、Fli-1、NF-E2在mRNA水平及蛋白水平表达的变化。 结果:1)生物信息学预测发现依硫磷酸可能调控细胞的分化,并得到依硫磷酸促进细胞分化相关的8个基因;2)本研究发现低浓度(0.1mmol/L)依硫磷酸能促进Dami细胞向成熟巨核细胞分化,而高浓度(1mmol/L)则明显抑制Dami细胞增殖;3)依硫磷酸(0.1mmol/L)能诱导Dami细胞由原始巨核细胞向成熟巨核细胞分化。表现为依硫磷酸处理第12天,Dami细胞出现血小板分界膜系统,直径20μM的细胞比例较对照增加24.63%,细胞表面CD41a Mean值增加206.43,CD33表达阳性率下降13.98%;和对照比,DNA倍体化2N下降20.93%,4N增加15.93%,8N增加8.62%,16N增加3.41%;4)Q-PCR和western blot结果显示,巨核细胞分化相关转录因子GATA-1、Fli-1、NF-E2在mRNA水平及蛋白水平表达没有升高。 结论:1)不同浓度依硫磷酸对Dami细胞作用不同,低浓度(0.1mmol/L)诱导分化,高浓度(1mmol/L)抑制其增殖;2) Dami细胞分化表现在细胞体积增大,产生血小板分界膜系统,细胞CD41a表达增加,CD33表达下降,DNA倍体化增加;3)巨核细胞分化相关转录因子GATA-1、Fli-1、NF-E2在mRNA及蛋白水平表达没有升高,需要进一步研究其转录活性的变化。
【图文】:
不同浓度依硫磷酸对Dami细胞增殖的影响
17 图 2 依硫磷酸在 0.1mmol/L 水平对 Dami 细胞表现出诱导分化作用(200×)图 A、C 为对照组;图 B、D 分别为依硫磷酸 0.1mmol/L 处理 12 天,Giemsa 染色见胞倍体增加(A、B);光镜下见处理组 Dami 细胞体积增大(C、D)。
【学位授予单位】:中国人民解放军医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R96
本文编号:2565968
【图文】:
不同浓度依硫磷酸对Dami细胞增殖的影响
17 图 2 依硫磷酸在 0.1mmol/L 水平对 Dami 细胞表现出诱导分化作用(200×)图 A、C 为对照组;图 B、D 分别为依硫磷酸 0.1mmol/L 处理 12 天,Giemsa 染色见胞倍体增加(A、B);光镜下见处理组 Dami 细胞体积增大(C、D)。
【学位授予单位】:中国人民解放军医学院
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【学位授予年份】:2014
【分类号】:R96
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本文编号:2565968
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