亲水相互作用色谱-高分辨质谱分析不同糖胺聚糖寡糖
发布时间：2019-12-02 16:20
【摘要】：建立了亲水相互作用-液相色谱-质谱联用分析糖胺聚糖类复杂样品的方法。在高分辨质谱联用条件下,流动相5 mmol/L醋酸铵缓冲溶液可有效使用。在此基础上,对不同的色谱柱进行了筛选。其中,氨基亲水相互作用色谱柱对糖胺聚糖类寡糖的分离效果不佳;酰胺基亲水相互作用色谱柱仅适用于透明质酸寡糖的分析,可以有效分离聚合度2~20的透明质酸寡糖;在较高温度下,两性离子基质的亲水相互作用色谱柱可以对聚合度2~30的透明质酸寡糖和聚合度2~12的硫酸软骨素寡糖有效分离;而二醇基亲水相互作用色谱柱对透明质酸(聚合度2~30)、硫酸软骨素(聚合度2~20)以及肝素(聚合度4~20)都适用,并呈现出较好的分离效果。本研究比较了不同类型的亲水相互作用色谱结合高分辨质谱对不同聚合度、不同电荷密度的糖胺聚糖寡糖的分离特点,建立了相应的高效分离和分析方法。本方法有较高的分辨率和质谱适用性。
【图文】：
15］中，氨基-HILIC色谱柱已被用于糖胺聚糖二糖分析［15］，但该法以高浓度不挥发性缓冲盐作为流动相，因此无法与质谱联用，而且对于寡糖的分离和分析并没有直接的报道。本实验使用氨基-HILIC色谱柱进行糖胺聚糖的寡糖分析，结果表明，即使在高浓度醋酸铵缓冲盐的条件下，寡聚糖仍然无法被完全洗脱(谱图未显示)，而据经验100mmol/L以上的挥发性盐已经对质谱检测造成了影响。302018t（min）A232（mAU）100-10-20-3020222426dp16dp14dp12dp10dp8dp6dp4dp2dp18dp202830图1酰胺基-亲水相互作用色谱柱30℃条件下所得透明质酸分离谱图Fig．1Chromatogramsofhyaluronicacid(HA)obtainedonamide-hydrophilicinteractionliquidchromatography(HILIC)column造成这种现象可能是该氨基柱中树脂表面键合的氨基基团与糖胺聚糖寡糖结合作用太强，，而挥发性盐的离子强度太弱，无法对寡糖进行洗脱，因此不能进行HPLC-MS分析。3．2酰胺基-HILIC色谱柱对糖胺聚糖类寡糖的分离采用酰胺基-HILIC色谱柱分别对HA、CS-A和HP进行分析，结果表明，HA寡聚糖能够得到很好的分离，如图1所示。根据相应质谱结果(图谱未显示)，色谱图中每个峰得到了准确的归属。其中HA寡聚糖在聚合度2～20的范围内能够得到很好的分离。然而在使用此色谱柱对CS-A与HP寡糖混合物进行分离时，在合理的缓冲盐浓度范围内无法有效洗脱寡糖(谱图未显示)。该色谱柱树脂表面的酰胺基团具有较弱的离子作用，能够与含有较少负电荷的HA的寡聚糖产生适当的相互作用，并能够有效分离HA寡糖。3．3两性离子(ZIC)-HILIC色谱柱对糖胺聚糖类寡糖的分析本实验使用ZIC-HILIC色谱柱分别对3种糖胺聚糖类寡糖进行了分析。结果表明，HA寡糖在聚合度
失，同时还保留了较高的分辨率(图2B)。此外，此色谱柱也对CS-A具有较好的分辨率(图2C)。但此色谱柱不适用于HP的分离分析。3020100-10500-50-100-1505-5-15-25-352.55.07.510.012.515.017.520.022.525.025.5t(min)2.55.07.510.012.515.017.520.022.525.025.5t(min)2.55.07.510.012.515.017.520.022.525.025.5t(min)ABCdp2dp4dp6dp8dp10dp12dp14dp16dp18dp20dp24dp30dp26dp28dp2dp4dp6dp8dp10dp12dp14dp16dp18dp20dp22dp24dp2dp4dp8dp10dp12dp22dp6A232(mAU)A232(mAU)A232(mAU)图2两性离子-HILIC色谱柱所得HA/硫酸软骨素A寡聚糖分离谱图。(A)色谱柱30℃条件下所得HA寡聚糖分离谱图(B)色谱柱85℃条件下所得HA寡聚糖分离谱图(C)色谱柱85℃条件下所得CS-A寡聚糖分离谱图Fig．2HA/chondroitinsulfateA(CS-A)oligosaccharidesobtainedonthezwitterionic(ZIC)-HILICcolumn．(A)ChromatogramofHAoligosaccharidesobtainedonZIC-HILICcolumnat30℃;(B)ZIC-HILICcolumnat85℃;and(C)ZIC-HILICcolumnat85℃3．4二醇基(Diol)-HILIC色谱柱对糖胺聚糖类寡糖的分离使用Diol-HILIC色谱柱分别对3种寡聚糖进行了分离。结果表明，HA寡糖在聚合度2～30范围内能够得到有效分离(图3A);CS-A寡糖在聚合度2～20范围内达到较好分离(图3B);HP寡糖在聚合度4～20范围内也得到了较高分辨率的分离(图3C)。质谱数据确定了每个相应色谱峰的聚合度(图谱未显示)。在图3可见，只有HA寡聚糖中一些低聚合度的寡糖出现了α-、β-共存导致的分岔现象。此类型色谱柱树脂表面二醇基的弱电离作用使得具有不同分子大小和不同电荷密度的这类聚?
【图文】：
15］中，氨基-HILIC色谱柱已被用于糖胺聚糖二糖分析［15］，但该法以高浓度不挥发性缓冲盐作为流动相，因此无法与质谱联用，而且对于寡糖的分离和分析并没有直接的报道。本实验使用氨基-HILIC色谱柱进行糖胺聚糖的寡糖分析，结果表明，即使在高浓度醋酸铵缓冲盐的条件下，寡聚糖仍然无法被完全洗脱(谱图未显示)，而据经验100mmol/L以上的挥发性盐已经对质谱检测造成了影响。302018t（min）A232（mAU）100-10-20-3020222426dp16dp14dp12dp10dp8dp6dp4dp2dp18dp202830图1酰胺基-亲水相互作用色谱柱30℃条件下所得透明质酸分离谱图Fig．1Chromatogramsofhyaluronicacid(HA)obtainedonamide-hydrophilicinteractionliquidchromatography(HILIC)column造成这种现象可能是该氨基柱中树脂表面键合的氨基基团与糖胺聚糖寡糖结合作用太强，，而挥发性盐的离子强度太弱，无法对寡糖进行洗脱，因此不能进行HPLC-MS分析。3．2酰胺基-HILIC色谱柱对糖胺聚糖类寡糖的分离采用酰胺基-HILIC色谱柱分别对HA、CS-A和HP进行分析，结果表明，HA寡聚糖能够得到很好的分离，如图1所示。根据相应质谱结果(图谱未显示)，色谱图中每个峰得到了准确的归属。其中HA寡聚糖在聚合度2～20的范围内能够得到很好的分离。然而在使用此色谱柱对CS-A与HP寡糖混合物进行分离时，在合理的缓冲盐浓度范围内无法有效洗脱寡糖(谱图未显示)。该色谱柱树脂表面的酰胺基团具有较弱的离子作用，能够与含有较少负电荷的HA的寡聚糖产生适当的相互作用，并能够有效分离HA寡糖。3．3两性离子(ZIC)-HILIC色谱柱对糖胺聚糖类寡糖的分析本实验使用ZIC-HILIC色谱柱分别对3种糖胺聚糖类寡糖进行了分析。结果表明，HA寡糖在聚合度
失，同时还保留了较高的分辨率(图2B)。此外，此色谱柱也对CS-A具有较好的分辨率(图2C)。但此色谱柱不适用于HP的分离分析。3020100-10500-50-100-1505-5-15-25-352.55.07.510.012.515.017.520.022.525.025.5t(min)2.55.07.510.012.515.017.520.022.525.025.5t(min)2.55.07.510.012.515.017.520.022.525.025.5t(min)ABCdp2dp4dp6dp8dp10dp12dp14dp16dp18dp20dp24dp30dp26dp28dp2dp4dp6dp8dp10dp12dp14dp16dp18dp20dp22dp24dp2dp4dp8dp10dp12dp22dp6A232(mAU)A232(mAU)A232(mAU)图2两性离子-HILIC色谱柱所得HA/硫酸软骨素A寡聚糖分离谱图。(A)色谱柱30℃条件下所得HA寡聚糖分离谱图(B)色谱柱85℃条件下所得HA寡聚糖分离谱图(C)色谱柱85℃条件下所得CS-A寡聚糖分离谱图Fig．2HA/chondroitinsulfateA(CS-A)oligosaccharidesobtainedonthezwitterionic(ZIC)-HILICcolumn．(A)ChromatogramofHAoligosaccharidesobtainedonZIC-HILICcolumnat30℃;(B)ZIC-HILICcolumnat85℃;and(C)ZIC-HILICcolumnat85℃3．4二醇基(Diol)-HILIC色谱柱对糖胺聚糖类寡糖的分离使用Diol-HILIC色谱柱分别对3种寡聚糖进行了分离。结果表明，HA寡糖在聚合度2～30范围内能够得到有效分离(图3A);CS-A寡糖在聚合度2～20范围内达到较好分离(图3B);HP寡糖在聚合度4～20范围内也得到了较高分辨率的分离(图3C)。质谱数据确定了每个相应色谱峰的聚合度(图谱未显示)。在图3可见，只有HA寡聚糖中一些低聚合度的寡糖出现了α-、β-共存导致的分岔现象。此类型色谱柱树脂表面二醇基的弱电离作用使得具有不同分子大小和不同电荷密度的这类聚?
【共引文献】
相关期刊论文 前4条
1 李媛媛;韦Z赯
本文编号：2568825
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yiyaoxuelunwen/2568825.html
最近更新
教材专著
