黄河三角洲来源的耐盐碱放线菌OUCMDZ-2399的抗生活性产物研究

发布时间：2017-03-20 03:03

  本文关键词：黄河三角洲来源的耐盐碱放线菌OUCMDZ-2399的抗生活性产物研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：微生物的多样性为新化合物的多样性提供了坚实的基础,也为生物化学的革新提供丰富的资源。目前有超过23,000个已知的天然来源化合物,其中42%来自于放线菌。在将近10,000个抗生素类天然产物中,就有45-55%来自于链霉菌的次级代谢产物。而最近的统计数据表明我们发现的微生物中,真菌仅占全部生物量的5%,细菌(包含放线菌)还不足0.1%。黄河三角洲是长期的海陆相互作用形成的具有复杂生态环境的地域,土壤盐碱化,部分地区盐度颇高。在兼具海陆特性的土壤中,土著的生物物种包括微生物都形成了较为独特的代谢方式,产生新颖的活性代谢产物。基于以上研究现状,这一区域的放线菌具有潜在研究价值。为研究该来源的具有耐盐碱特性的菌株次级代谢产物,我们使用化学特征与生物活性集成的筛选模式,同时追踪生物活性,对该地区的微生物进行了研究。主要内容包括：耐盐碱微生物的分离纯化,耐盐碱放线菌的生物化学筛选以及发酵条件优化；优选符合条件的放线菌进行发酵并分离纯化代谢产物；化合物的结构鉴定以及活性评价。从黄河三角洲土壤样品中分离纯化获得86株微生物,排重后余66株,包括47株放线菌和19株真菌。通过化学和活性双重标准的筛选,得到两株活性优良的耐盐碱放线菌OUCMDZ-2399和OUCMDZ-2407。通过从培养基、树脂、pH、盐度四个方面摸索放线菌的最佳生长条件,确定发酵OUCMDZ-2399。发酵完毕后对其次级代谢产物采用加压正向硅胶柱色谱、减压硅胶柱色谱、薄层色谱、凝胶柱色谱和半制备高效液相色谱等多种色谱分离技术进行分离纯化,每次纯化完毕后都进行定性的生物活性测试,以追踪活性化合物所在的流分,最终从OUCMDZ-2399中获得7个化合物,目前已鉴定其中3个。已鉴定的化合物均为Lobophorins化合物,结构上属于4-羟乙酰乙酸内酯(tetronate)化合物。利用药敏纸片法和微量比浊法对化合物进行抑菌活性评价,确定化合物对金黄色葡萄球菌的MIC等于甚至低于阳性药环丙沙星,对于枯草芽孢杆菌也有较好的抑制活性。其后采用MTT法和CCK-8法对化合物进行细胞毒活性测试,基本上对于A549、 K562、 MCF-7以及HL-60均无抑制作用。综上所述,本文结合化学与生物活性集成筛选模式得到一株耐盐碱放线菌,并对其进行次级代谢产物的研究,分离鉴定了3个化合物,并对其进行抑菌和细胞毒的初步评价。以上结果表明黄河三角洲中确实有很大生物及化学的挖掘潜质,放线菌一如既往表现出出色的研究潜力。
【关键词】：耐盐碱放线菌 黄河三角洲 次级代谢产物 抑菌活性 Lobophorins
【学位授予单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R915
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• Abbreviation10-12
• 前言12-34
• 1 Tetronates化合物的结构12-16
• 2 Lobophorins化合物的活性16-19
• 3 Lobophorins化合物的生物合成19-25
• 4 Lobophorins化合物的全合成25-30
• 小结30-31
• References31-34
• 第一章 耐盐碱菌株的分离及筛选34-65
• 1.1 微生物的分离纯化34-38
• 1.2 菌株的排重及保藏38-42
• 1.3 次级代谢产物活性筛选42-50
• 1.4 候选菌株发酵条件的摸索50-63
• References63-65
• 第二章 耐盐碱放线菌OUCMDZ-2399抑菌活性产物研究65-85
• 2.1 菌株发酵及化合物分离65-72
• 2.2 化合物结构鉴定72-81
• 2.3 化合物结构表征81
• 2.4 化合物的活性评价81-83
• 2.5 小结与讨论83-84
• Reference84-85
• 第三章 实验部分85-94
• 3.1 实验材料、试剂及仪器85-89
• 3.2 试验方法89-93
• References93-94
• 结语与创新点94-95
• 个人简历及相关研究成果95
• 相关研究成果95-96
• 致谢96-97
• 附录97-104

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本文编号：257024