新型褪黑素受体激动剂Neu-p11对2型糖尿病大鼠糖脂代谢的调节作用及HPA轴相关机制研究

发布时间：2020-02-06 23:05

【摘要】：目的:观察新型褪黑素受体激动剂Neu-p11对2型糖尿病(T2DM)大鼠糖脂代谢的调节作用,并探讨其HPA轴相关机制,研究治疗T2DM的新方法,为T2DM治疗开辟新途径。方法:Wistar雌性大鼠72只,随机抽取9只(1只用于制作病理切片)设为正常对照组(Control)、给予正常饲料喂养,其余大鼠给予高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素进行造模处理。选取血糖≥11.1mmol·L-1者为模型成功的2型糖尿病大鼠,根据血糖和体重水平分成模型组(Model)、褪黑素对照组(MLT)及Neu-p11高(Neu-H)、中(Neu-M)、低(Neu-L)三个剂量给药组,每组8只。按照1ml·200g-1灌胃给药体积分别给予正常对照组和模型组等量生理盐水,MLT组20 mg·kg-1褪黑素,Neu-p11 3个给药组(剂量分别为20 mg·kg-1、10 mg·kg-1和5 mg·kg-1)。每日记录大鼠体重、摄食、饮水量,每周测定大鼠空腹血糖(FBG)水平,第25天和第33天分别对大鼠进行情绪唤醒试验和矿场试验,第7天、21天、35天测定大鼠血浆血脂四项水平:总胆固醇(TC)水平、甘油三酯(TG)水平、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,第21天测定大鼠腹腔糖耐量(IPGTT)水平、第28天测定大鼠胰岛素耐量(ITT)水平,第35天测定大鼠胰岛素(INS)水平,第7天、14天、35天测定大鼠促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)水平,第35天,将各组用于制作病理切片的大鼠(用于制作病理切片的大鼠为在成功模型大鼠中挑取血糖值相近的5只大鼠,将其随机分为模型组、MLT组、Neu-H、Neu-M、Neu-L组,给予相应药物,单独饲养。)进行灌注后,取大脑、肝脏、脂肪、胰腺、肾上腺、脾脏浸泡于4%多聚甲醛中用于制作病理切片。其余大鼠断头处死,摘取肝脏、双侧肾脏、脾脏及双侧肾上腺组织,称重并计算脏器指数,称取适量肝脏和肌肉组织用于测定糖原含量,测定肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性,利用RT-PCR技术检测大鼠肝脏组织糖皮质激素受体(GR)、葡萄糖转运体-4(GLUT-4)、过氧化物酶增殖体活化受体-γ(PPAR-γ)mRNA,海马组织GR、11β羟基类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)mRNA,肾上腺组织GR、MT1、MT2mRNA,脂肪组织GR、脂联素(Adipo)、PPAR-γ、瘦素(Leptin)、GLUT-4mRNA表达;并利用Western Blot技术检测大鼠肝脏、海马、下丘脑、垂体及肾上腺组织GR、MT1、MT2蛋白表达。利用HE染色技术观察大鼠胰腺、肝脏、海马、肾上腺、脾脏组织的病理变化。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠摄食量和饮水量显著增加(P0.05),体重呈降低趋势,FBG显著升高(P0.01),情绪唤醒得分降低,水平运动得分和垂直运动得分显著降低,分别达56.76%(P0.01)和57.24%(P0.01),中央停留格时间显著延长105.04%(P0.05),糖耐量和胰岛素耐量水平显著降低(P0.05),血浆TC、TG显著升高(P0.05,P0.01),HDL-C显著降低(P0.05),LDL-C有升高趋势,肝糖原含量显著降低(P0.01),肌糖原含量有升高趋势,肝脏、肾脏、肾上腺指数显著升高(P0.01),脾脏指数也呈升高趋势,肝脏G-6-Pase活性显著升高(P0.01),d35 INS水平呈升高趋势,d7血浆ACTH和CORT水平均有升高趋势,d14和d35血浆ACTH和CORT水平均有降低趋势,糖脂代谢及HPA轴相关基因和蛋白表达异常。与模型组相比,MLT和Neu-p11给药组大鼠摄食量均有降低趋势,且在给药第一周和第三周时MLT和Neu-p11不同剂量组模型大鼠摄食量分别呈现显著性;各给药组大鼠饮水量均显著降低;体重和行为学指标均得到改善;Neu-p11各给药组FBG呈降低趋势,且在d14和d35分别表现出显著性差异;糖耐量、胰岛素耐量、血脂、脏器指数、肝脏G-6-Pase活性及HPA轴相关激素水平均得以改善;肝脏、海马和脂肪GR mRNA(P0.05,P0.01),肾上腺组织MT1和MT2 mRNA(P0.05,P0.01),脂肪PPAR-γ、GLUT-4和AdipomRNA(P0.05,P0.01)上调;海马组织11β-HSD1 mRNA,脂肪组织leptin mRNA(P0.05,P0.01)下调,肝脏、海马及HPA轴相关组织的GR蛋白表达(P0.05,P0.01)上调,其中Neu-L可显著下调海马、垂体及肾上腺组织MT1和MT2蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:Neu-p11可改善高脂联合小剂量链脲佐菌素诱导的T2DM大鼠的糖脂代谢,其机制可能与其调节肝脏、海马、下丘脑、垂体、肾上腺和脂肪组织糖脂代谢相关基因和蛋白的表达及抑制HPA轴高活性相关。
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R965

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本文编号：2577011