克班宁长循环脂质体的制备工艺

发布时间：2020-03-15 09:35

【摘要】：目的:研究克班宁长循环脂质体的处方筛选和制备工艺。方法:采用硫酸铵梯度法制备克班宁长循环脂质体,以包封率和载药量为评价指标,采用葡聚糖凝胶过滤法分离脂质体,紫外分光光度法测定克班宁含量,采用正交设计优化制备工艺。结果:最佳工艺为:药脂比为1∶6,胆固醇与磷脂比为9∶12,0.15 mol·L-1的硫酸铵溶液,以PBS液(p H 7.4)为透析介质,在40℃水浴,40 r·min-1条件下孵化20 min。结论:硫酸铵梯度法制备的克班宁长循环脂质体处方合理,工艺可行,包封率较高。
【图文】：

流出曲线,全波段,紫外扫描

?ml克班宁脂质体和1ml克班宁盐酸溶液各自置于10ml量瓶中，用2ml破膜剂(异丙醇∶无水乙醇4∶1)振摇破坏，用相同的缓冲溶液定容，分别制成澄清溶液a和b，在200～500nm之间做紫外扫描，由图1可知在280nm处克班宁脂质体和克班宁盐酸溶液有最大吸收峰，而空白脂质体无吸收峰，因此选择UV测定波长为280nm。2．2．2标准曲线的绘制精密称取克班宁标准品适量于容量瓶中，加少量无水乙醇溶解，加pH7．4a．克班宁脂质体;b．克班宁盐酸溶液;c．空白脂质体a．crebanineliposomes;b．crebaninehydrochloride;c．blankliposomes图1200～500nm全波段紫外扫描图Fig1Wholebandultravioletscanningmapinrangeof200-500nm的PBS缓冲液制成100μg·ml－1的标准溶液，精密量取0．25，0．50，1．00，1．50，3．00，4．00，5．00ml于25ml量瓶中，分别加入2．00ml破膜剂，再加入pH7．4的PBS缓冲液稀释至刻度，在280nm测定吸光度。另取2ml破膜剂置于25ml量瓶中，用pH7．4的PBS溶液定容，作为空白。用吸光度A对浓度C作线性回归方程:C=16．979A－0．063(Ｒ2=0．9998)，，在1～20μg·ml－1范围内线性关系良好。2．2．3葡聚糖凝胶柱层析法称取SephadexG-501g，加入纯化水，置室温下24h进行溶胀。过滤除去纯化水，加入适量pH7．4的PBS浸泡过夜，除尽气泡。在不断搅拌下缓缓加入一根底部装有300目筛网的玻璃层析柱(1．8cm×10cm)，以pH7．4的PBS缓冲液不断冲洗使凝胶柱平衡。精密吸取克班宁脂质体1．0ml，上SephadexG-50柱用pH7．4PBS洗脱，流速0．02ml·min－1，每份2m1，共收集20份;每份加破膜剂(异丙醇∶无水乙醇=4∶1)2ml，混匀至透明，以PBS和破膜剂(1∶1)的混合溶液为空白对照，在280nm处测定吸光度A，绘制脂质体流出曲线1，结果见

洗脱曲线,洗脱曲线

胶柱层析法称取SephadexG-501g，加入纯化水，置室温下24h进行溶胀。过滤除去纯化水，加入适量pH7．4的PBS浸泡过夜，除尽气泡。在不断搅拌下缓缓加入一根底部装有300目筛网的玻璃层析柱(1．8cm×10cm)，以pH7．4的PBS缓冲液不断冲洗使凝胶柱平衡。精密吸取克班宁脂质体1．0ml，上SephadexG-50柱用pH7．4PBS洗脱，流速0．02ml·min－1，每份2m1，共收集20份;每份加破膜剂(异丙醇∶无水乙醇=4∶1)2ml，混匀至透明，以PBS和破膜剂(1∶1)的混合溶液为空白对照，在280nm处测定吸光度A，绘制脂质体流出曲线1，结果见图2。精密吸取游离克班宁0．2ml，上SephadexG-50柱用pH7．4的PBS洗脱，洗脱方式同上述脂质体洗脱，绘制游离克班宁药物流出曲线2，结果见图2。结果表明载药的克班宁长循环脂质体主要集中在前13个流份，即前26ml中，游离的克班宁主要分布在26～30ml的范围内。1-克班宁长循环纳米脂质体;2-游离克班宁药物1-longcirculatingcrebanineliposomes;2-freecrebaninedrugs图2洗脱曲线Fig2Elutioncurve·1077·中国医院药学杂志2015年6月第35卷第12期ChinHospPharmJ，Jun2015，Vol35，No．12

【相似文献】