新型具有抗肿瘤活性的谷氨酸脱氢酶抑制剂作用机制机理的研究

发布时间：2020-03-18 16:10

【摘要】：谷氨酸脱氢酶(GDH)在神经疾病、肿瘤代谢和高胰岛素血症-高氨血症综合症(HHS)中发挥重要作用。然而,现被发现的谷氨酸脱氢酶抑制剂却很少。本文成功克隆表达人源谷氨酸脱氢酶,由此进一步筛选出有效的谷氨酸脱氢酶抑制剂依布硒啉,依布硒啉对人源及大肠杆菌来源谷氨酸脱氢酶均有很好的抑制作用。在此基础上,验证了依布硒啉的抗肿瘤活性,发现依布硒啉对A549以及H22细胞株生长均有较好抑制作用。随后研究了化合物依布硒啉抑制人源以及大肠杆菌来源谷氨酸脱氢酶活性的机制。利用实验室合成的生物素标记依布硒啉衍生物进行了分子相互作用分析,随后利用实验室合成的荧光素标记依布硒啉衍生物进行了胶迁移实验,发现依布硒啉与人源谷氨酸脱氢酶活性位点可逆结合,而与大肠杆菌来源谷氨酸脱氢酶共价结合。蛋白组学分析证实依布硒啉可以与大肠杆菌来源谷氨酸脱氢酶活性位点附近的氨基酸残基结合,推测具体结合位点可能为该片段上与NADP~+十分接近的半胱氨酸残基,此推测与酶的点突变实验结果一致。
【图文】：

图 1-1 人源谷氨酸脱氢酶六聚体结构ure 1-1 Human glutamate dehydrogenase hexamerhGDH1 和 hGDH2 两种亚型，GDH1 普遍存于更高等级的哺乳动物的基因复制[8]，它 和位于 X 染色体上的 GluD2 基因编码。G，而 GluD2 基因无内含子。关于 GluD2 是：GluD1 基因的 mRNA 反转录后插入到选择成为了 GluD2[17]。这一过程在生物学中反转录表达的亲代基因在新的基因组位置2 的基因序列具有显著的相似性；蛋白序]。动力学

乎随着催化裂隙的打开而膨胀。位于彼此顶部的三对亚基作为刚性结构运动，，当它们远离彼此时，六聚体核心处的空腔被打开。1.3 细胞内的谷氨酸脱氢酶变构调节剂1.3.1 ADP 对谷氨酸脱氢酶的抑制ADP 与酶的结合位点位于 NAD 结合域的背面，并在轴螺旋的下面。如下图B 所示，在轴螺旋上的 R463 与结合的 ADP 磷酸基团相互作用，这种相互作用可能有助于 NAD 结合域的旋转和产物的释放。为了证明这一点，将 R463 突变为丙氨酸，结果导致 ADP 活化作用的丧失，这基本上表明 ADP 促进活性位点裂隙的打开，从而促进底物或产物释放。 更确切地说，ADP 能帮助降低打开催化裂口所需的能量。图 1-2 B 所示的为 ADP 与 GDH 结合的放大示意图，ADP 与人谷氨酸脱氢酶结合的关键残基已在图中标出。
【学位授予单位】：浙江工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R96

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本文编号：2588912