PBA在大鼠体内的毒代动力学研究

发布时间：2020-03-21 07:55

【摘要】：目的:1.考察SD大鼠分别灌胃及静脉注射给予不同剂量PBA后血浆中PBA的浓度变化,研究PBA经口及静脉给药染毒的吸收特性,以探索并完成PBA的毒代动力学研究。2.研究大鼠灌胃PBA后其在心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胃肠道、甲状腺、生殖器、脂肪、皮肤等组织中的分布情况。3.研究大鼠灌胃PBA后,PBA在尿液、粪便和胆汁中的排泄情况。方法:1.建立SD大鼠血浆中4-氯-2氟-3-甲氧基苯硼酸(PBA)的LC-MS测定方法。取检疫合格的SD大鼠,分为单次灌胃低剂量组(10 mg/kg),单次灌胃中剂量组(30rmg/kg),单次灌胃高剂量组(100mg/kg),单次静注组(5mg/kg),每组8只,雌雄各半,染毒前禁食不禁水。动物染毒后从眼眶静脉丛取血并肝素抗凝,取血量为0.3 mL。灌胃给药组血样采集时间分别为染毒前,染毒后10 min、30min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12 h 和 24 h。静脉注射组血样采集时间分别为染毒前,染毒后5min、15min、30min、45min、1h、2h、4 h、6 h、8 h、12 h和24 h。取血浆样本,加入内标溶液(对甲氧基苯甲酸400ng/mL)涡旋混合1min;加入乙腈0.3 mL,涡旋混合2 min,离心10 min(13000 rpm),分离上清液于另一试管中,取10 μL进行分析。采用内标法进行定量分析,获得血浆中PBA的浓度,并采用DAS药动学软件拟合主要动力学参数 AUC、Cmax、Tmax、MRT、t1/2。2.考察大鼠灌胃给予100mg/kg PBA 0.5h、2h、8h和168h后,PBA在心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胃肠道、甲状腺、生殖器、脂肪、皮肤等组织和血浆中的分布情况。3.建立了大鼠尿液、粪便和胆汁中PB A的LC-MS测定方法,研究大鼠灌胃PBA 100 mg/kg后,尿液、粪便和胆汁中PBA的排泄情况。结果:1.SD大鼠分别灌胃及静注给予不同剂量PBA后血浆中PBA的浓度变化:(1)血浆中的内源性杂质不干扰PBA测定,血浆中PBA提取回收率为88.8%-94.4%,日间精密度6.4%-8.9%,日内精密度3.85%-5.87%,准确度为97.8%-105.5%。PBA的线性范围为20-2500ng/ml,标准曲线的相关系数r0.9914。PBA 的定量下限为 20 ng/ml(RSD=9.67%)。(2)雌性大鼠 10mg/kg 剂量组单次灌胃染毒 AUC(0-∞)、Cmax、Tmax、MRT(0-∞)、t1/2分别是 3602.2±672μg/L*h、532±77 μg/L、2.625±0.75 h、10.19±2.36 h、7.69±3.44 h,绝对生物利用度为10.2%。30mg/kg剂量组灌胃染毒AUC(0-∞)、Cmax、Tmax、MRT(0-∞)、t1/2分别是 7533.3±3131.7μg/L*h、776±179μg/L、3±0.816h、10.54±3.71h、7.039±2.951h,绝对生物利用度为 7.1%。100mg/kg 剂量组灌胃染毒 AUC(0-∞)、Cmax、Tmax、MRT(0-∞)、t1/2 分别是 10020.1±3225.7 μg/L*h、1120±79 μg/L、3±0.816 h、10.85±3.87 h、6.918±3.32 h,绝对生物利用度为 2.9%。5mg/kg剂量组单次静注染毒AUC(0-∞)、Cmax、Tmax、MRT(0-∞)、t1/2分别是17575.2±5151.3μg/L*h、3465±1073 μg/L、0.083±0.00h、23.81±16.74h、18.29±12.82h。(3)雄性大鼠10mg/kg剂量组单次灌胃染毒AUC(0-∞)、Cmax、Tmax、MRT(0-∞)、t1/2分别是 2062.4±438.6 μg/L*h、339±131 μg/L、2.6±2.3 h、8.00±2.53 h、3.97±2.21 h,绝对生物利用度为8.9%。30mg/kg剂量组灌胃染毒AUC(0-∞)、Cmax、Tmax、MRT(0-∞)、t1/2分别是6421.5±1654.6μg/L*h、775±444 μg/L、2.625±1.109h、16.02±8.48h、11.86±8.38h,绝对生物利用度为9.2%。100mg/kg剂量组灌胃染毒 AUC(0-∞)、Cmax、Tmax、MRT(0-∞)、t1/2 分别是 9119.9±3432.2μg/L*h、1426±866 μg/L、3±0.816 h、12.43±3.66 h、9.22±4.48 h,绝对生物利用度为 3.9%。5mg/kg剂量组单次静注染毒AUC(0-∞)Cmax、Tmax、MRT(0-∞)、t1/2分别是11606.5±3650.5μg/L*h、3830±466μg/L、0.083±0.00h、17.37±20.55h、13.92±18.14h。2.建立了大鼠肝脏组织中PBA的LC-MS测定方法,组织样品中内源性杂质不干扰PBA的测定。组织匀浆中PBA的准确度在100.9%-104.7%之间,日内精密度在8.8%-10.3%之间,日间精密度在5.9%-8.4%之间。PBA的线性范围为20-1600ng/ml,标准曲线的相关系数r0.9932。PBA的定量下限为20 ng/ml(RSD%=1.9%)。因此,本方法适合于组织样品中PBA的分析。结果发现,PBA在大鼠组织中分布广泛,四个取样时间点PBA在肝脏、胃肠道、肾脏、心脏、皮肤、脾脏等组织都广泛分布,甲状腺和生殖器组织中仅在8h时间点检测到PBA的分布,皮肤组织中除0.5 h时间点外都能检测到分布。值得注意的是在168 h后PBA仍在除甲状腺和生殖器外的组织中有较高浓度的分布,提示该化合物在体内的残留时间较长。3.大鼠尿液、粪便和胆汁中的内源性杂质不干扰PBA的测定。尿液中PBA检测的日内精密度在6.0%-10.5%之间、日间精密度在7.3%-12.0%之间;线性范围为20-2000ng/ml;定量下限为20ng/ml(RSD%=9.0%),基质效应介于92.4%-111.5%。稳定性研究结果表明:尿液样品在-20 ℃冷冻保存30天、反复冻融3次、室温放置24 h、处理后样品4℃放置24h,均符合要求。大鼠单次灌胃100mg/kgPBA后,尿液、粪便和胆汁中PBA的累积排泄率均非常低,染毒168 h后的尿液和粪便样品中PBA的总平均排泄率分别0.214±0.128‰、0.295士0.062‰,染毒48 h后的胆汁样品中PBA的总平均排泄率为0.0607±0.0212‰。结论:1.本试验结果表明,PBA灌胃给予大鼠后在大鼠体内有一定的吸收,但绝对生物利用度在雌性和雄性大鼠中分别小于10.2%和9.2%,随着染毒剂量的增加口服生物利用度下降显著。PBA在大鼠体内的暴露水平与染毒剂量成非线性动力学行为,系统暴露量没有随染毒剂量线性增加。2.PBA的组织分布结果提示其在肝脏、胃肠道、肾脏、心脏等中有高浓度的分布,而且组织中残留时间较长。3.排泄研究结果表明,大鼠灌胃给予PBA后,尿液、粪便和胆汁中PBA的累积排泄均非常低,累积排泄率粪便尿液胆汁。
【图文】：

色谱图,内标,色谱图,代表性

取６只不同ＳＤ大鼠（雌雄各半）的空白血浆９０邋ｐＬ，置２．０邋ｍＬ离心管中，除不逡逑加内标外（以５邋ｐＬ甲醇代替），其余按“血浆样品的处理”项下方法操作，在本实验逡逑ＨＰＬＣ条件下进样１０［ｘＬ，进行ＨＰＬＣ分析，获得空白血浆色谱图（图１Ａ）；将一定逡逑浓度的ＰＢＡ标准系列溶液及内标溶液加入空白血浆中，依同法操作，获得相应的逡逑色谱图（图１Ｂ），记录内标和ＰＢＡ标准品的保留时间；取灌胃染毒ＰＢＡ的ＳＤ大鼠逡逑１．５邋ｈ时间段血浆样品，依同法操作，得色谱图（图１Ｃ）。该色谱条件下，，ＰＢＡ的逡逑出峰时间约为２．８ｍｉｎ，内标的出峰时间约为２．５邋ｍｉｎ。结果表明，在本实验条件下，逡逑ＰＢＡ标准品和内标分离良好，血浆中的内源性不干扰测定。逡逑６逡逑

色谱图,肝组织,色谱图,空白

逡逑图２．１Ｂ空白肝组织加入浓度为２００ｎｇ／ｍｌＰＢＡ的色谱图逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．１Ｂ邋Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｂｌａｎｋ邋ｌｉｖｅｒ邋ｔｉｓｓｕｅｓ邋ａｄｄｉｎｇ邋２００ｎｇ／ｍｌ邋ＰＢＡ逡逑３７逡逑
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R99

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