二甲双胍对人肺癌细胞HCC827的抗肿瘤作用及机制研究

发布时间：2020-03-30 11:42

【摘要】：目的:二甲双胍是使用最广泛的抗糖尿病药物之一,也是一种新型的细胞凋亡诱导剂。最近的研究证明使用二甲双胍可降低某些癌症的发病率,并且越来越多的证据表明该药物作为抗癌药物具有其潜在功效。因此,本研究探讨了二甲双胍对人肺癌细胞HCC827的抗肿瘤作用,并探讨其可能的抗肿瘤作用机制。方法:CCK-8法检测不同浓度二甲双胍作用于HCC827细胞24 h、48h、72 h后对细胞增殖的影响;DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚)染色检测细胞凋亡;JC-1(线粒体膜电位)试剂盒检测细胞线粒体膜电位;流式细胞仪定量分析各组细胞的凋亡率;DCFH-DA(2,7-二氢二氯荧光黄双乙酸钠)荧光探针检测ROS(活性氧);Dihydroethidium荧光探针检测细胞内超氧阴离子;脂质氧化检测试剂盒检测MDA(丙二醛);实时PCR检测BAX,BCL-2 mRNA转录情况,western blot检测AMPK/mTOR通路蛋白,凋亡相关基因BAX、BCL-2以及DNA损伤蛋白p-H2A.X。结果:1.二甲双胍对HCC827细胞增殖的作用HCC827细胞经不同浓度二甲双胍处理后,细胞生长速度减慢,提示二甲双胍对HCC827细胞的生长有明显的抑制作用,并且呈现浓度和时间的依赖性。2.DAPI染色检测细胞凋亡对照组细胞形态为圆形,染色均匀,而经不同浓度二甲双胍处理的细胞,HCC827细胞呈现出典型凋亡特征:细胞变小,染色质浓缩,边缘化甚至产生凋亡小体。3.线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1试剂盒)检测线粒体膜电位经二甲双胍干预的实验组绿/红荧光比值比阴性对照组变大,提示二甲双胍可降低肿瘤细胞线粒体膜电位(P0.01)。4.流式细胞仪检测HCC827细胞凋亡情况结果显示,10 mM、20 mM、40 mM组的细胞早期凋亡比例呈现上升趋势,与对照组相比,实验组的细胞凋亡率有显著性差异(P0.01)。5.二甲双胍对HCC827细胞ROS和MDA的影响从结果我们可以看出,与对照组相比,二甲双胍干预后,细胞内的活性氧随着给药浓度的升高而增加;二甲双胍干预后,细胞中MDA水平升高(P0.05)。6.二甲双胍对DNA损伤标志物p-H2A.X的作用二甲双胍可诱导ROS升高而引起HCC827细胞DNA损伤,结果显示二甲双胍可诱导DNA损伤标志物p-H2A.X表达增加(P0.01)。7.二甲双胍对AMPK/mTOR蛋白通路的作用HCC827细胞经二甲双胍干预48 h后,与对照组相比,p-AMPK表达上调(P0.05),p-mTOR的表达无明显变化。8.二甲双胍对细胞凋亡相关基因的作用HCC827细胞经二甲双胍处理48 h后,与对照组相比,细胞凋亡基因BAX表达增高且其对应的mRNA表达也升高、BCL-2表达降低且其mRNA也表达降低。结论:1.二甲双胍能够抑制人肺癌细胞HCC827的增殖,并且呈现出剂量与时间的依赖性。2.二甲双胍能够诱导人肺癌细胞HCC827细胞凋亡。二甲双胍诱导HCC827细胞的凋亡机制与P-AMPK蛋白、BAX/BCL-2的表达上调和诱发活性氧的生成有关。
【图文】：

二甲双胍,肺癌细胞

CCK-8法测定二甲双胍对人肺癌细胞HCC827增值的影响

细胞凋亡

Fig.1 The effect of metformin on the proliferation of human lung cancerHCC827 cells was detected by CCK-8Assay.Metformin was in 6 concentration gradients of 0 mM, 5 mM, 10 mM, 20 mM40 mM, and 80 mM. HCC827 cells were treated for 24 h, 48 h and 72 h. Dawere presented as mean ± SEM, n=3. *P < 0.05 vs control; **P < 0.01 control.
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R96

【参考文献】