喜树碱衍生物CZ48肠吸收特性的研究

发布时间：2020-04-12 18:30

【摘要】：喜树碱(CPT)是从我国特有树种喜树(Camptotheca acuminala)中分离得到的一种具有广谱抗肿瘤活性的生物碱,但存在毒性强、活性不明显的问题。CZ48是为了稳定CPT活性内酯结构而设计合成的CPT衍生物,具有良好的抗肿瘤活性,微囊化CZ48(micronized CZ48,MCZ48)为,是CZ48用于临床研究的剂型。本文利用大鼠在体肠灌流模型和Caco-2细胞模型研究了 CZ48的肠吸收特性,并比较了 CZ48原药和MCZ48制剂吸收特性的差异。(1)建立了高效液相色谱-荧光检测CZ48在Caco-2细胞转运液和大鼠在体肠灌流液中的方法。选择CZ44为内标,采用Thermo Hypersil Gold C18色谱柱,水(含0.1%乙酸)为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱,流速为1.2 mL/min,激发波长(Ex)为380 nm,发射波长(Em)为418 nm,进样体积为40 μL,运行时间为20 min。该方法简单、快速、准确,可成功应用于CZ48的肠吸特性研究。(2)利用Caco-2细胞模型,考察了不同浓度CZ48(250、500、1000nM)的双向转运,以及pH、温度、P糖蛋白(P-gp)抑制剂维拉帕米、多药耐药蛋白(MRP)抑制剂吲哚美辛、磷酸酶抑制剂钒酸钠、旁路转运增强剂EDTA对CZ48双向转运的影响。结果表明CZ48为吸收良好药物,中性条件更利于CZ48的吸收,温度对CZ48的肠吸收无显著性影响,P-gp抑制剂维拉帕米、MRP抑制剂吲哚美辛可以促进CZ48的肠吸收,旁路转运增强剂EDTA可以促进CZ48双向转运。考察了 MCZ48(250、500、1000 nM)的双向转运,MCZ48制剂未显著改变CZ48的肠吸收。(3)建立了大鼠在体肠灌流模型,考察了不同浓度CZ48(250、500、1000 nM)在不同肠段的吸收,以及P-gp抑制剂维拉帕米、MRP抑制剂吲哚美辛、磷酸酶抑制剂钒酸钠和旁路转运增强剂EDTA对CZ48肠吸收的影响;考察了不同浓度MCZ48(250、500、1000nM)在不同肠段的吸收。结果表明,CZ48在各肠段的吸收没有显著性差异,没有浓度依赖性,肠吸收效果良好,主要以被动转运吸收。维拉帕米、吲哚美辛、EDTA均可以促进CZ48的肠吸收,钒酸钠对CZ48肠吸收没有显著性影响;MCZ48在各肠段的吸收没有显著性差异,肠吸收效果较好。三个浓度MCZ48灌流的结果没有显著性差异,表明MCZ48在大鼠肠道内吸收没有浓度依赖,制剂未显著改变CZ48的肠吸收特性。(4)MCZ48的肠吸收效果与CZ48没有明显差异,大鼠在体肠灌流结果与Caco-2细胞模型结果一致,MCZ48并不是通过改变CZ48肠吸收特性来提高临床生物利用度的,为今后的临床研究提供必要的基础。
【图文】：

标准样品,空白,谱图,样品

ｍ＾邋（ｄＱ／ｄｔ）邋／邋（ＡｘＣ0）逡逑中ｄＱ／ｄｔ为单位时间药物转运量（ｎＭ／ｓ），，Ａ为转运膜的面积（ｃｍ２），ＣＱ的原始浓度（ｎＭ）邋，邋Ｐａｐｐ为表观渗透系数，单位为ｃｍ／ｓ。逡逑于每次取样后补液会稀释转运溶液，因而累计转运量Ｑ邋（ｎｍｏｌ）通过以下公：逡逑＝邋Ｃｎ邋？邋Ｖｒ邋＋邋Ｖ？邋？邋（Ｃ１＋Ｃ２＋逦＋Ｃｉ）邋（ｉ＝ｎ－ｌ）逡逑中Ｃｎ为第ｎ个样品浓度的测定值，Ｖｎ为第ｎ个样品的取样体积，Ｖｒ为接收积。逡逑排率Ｅｒ－Ａｐｐ邋（ＢＬ—ＡＰ）邋／ＰａｐｐｃＡＰ－ＢＬ，逡逑果与讨论逡逑方法验证逡逑１）方法专属性逡逑照上述实验确定的样品处理方法和ＨＰＬＣ条件下，生物样品中的杂质对ＣＺ４标的测定均不产生干扰，方法选择性好。ＣＺ４８保留时间为１４．２１邋ｍｉｎ，内为１２．９７邋ｍｉｎ，结果显示，两种种物质具有较好的分离，方法专属性良好。逡逑

方向,实验参数,浓度

同浓度ＣＺ４８的双向转运实验参数（Ａ）邋ＡＰ—ＢＬ方向转运量；（Ｂ）邋；（Ｃ）邋ＡＰ—ＢＬ方向Ｐａｐｐ值；（Ｄ）邋ＢＬ—ＡＰ方向Ｐａｐｐ值；（Ｅ）－１６－逡逑
【学位授予单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R965

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