蚕丝蛋白肽免疫调节及与化疗的联合作用

发布时间：2020-04-13 23:04

【摘要】：目的:蚕丝蛋白肽(silk fibroin peptide,SFP)是由清华大学生物力学与医学工程研究所赵红平课题组通过水解法提取的一种多肽,前期已经证明蚕丝蛋白肽具有抗肿瘤、抗氧化、提高正常小鼠以及免疫抑制小鼠的免疫调节功能,本课题的主要目的是研究SFP在肿瘤环境下对小鼠免疫系统的调节效应,并初步探索其作用机制,在此基础上研究SFP与化疗药物联用是否有解毒增效作用。方法:1.为评价SFP的抗肿瘤作用,选用BALB/C小鼠,构建S180皮下实体瘤模型,随机分成对照组(生理盐水)、阳性对照药胸腺五肽组(1mg/kg)、SFP低剂量(300 mg/kg)和高剂量组(600 mg/kg),腹腔注射连续给药28天,给药期间记录小鼠体重、摄食饮水量及肿瘤体积变化,观察小鼠生命体征,结束后检测血常规并解剖观察主要脏器有无病变,剥离瘤块计算抑瘤率。2.为研究SFP对荷瘤小鼠的免疫调节功能,选用BALB/C小鼠,构建S180皮下实体瘤模型,随机分成对照组(生理盐水)、阳性对照药胸腺五肽组(1 mg/kg)、SFP低剂量(300 mg/kg)和高剂量组(600 mg/kg),腹腔注射连续给药28天后解剖小鼠,取脾脏、胸腺计算免疫脏器指数;提取脾淋巴细胞,通过MTT、流式等方法分别检测淋巴细胞增殖能力和细胞亚群分布,血凝法检测血清溶血素的含量,流式细胞仪检测血清中IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TNF等细胞因子的含量,明确SFP对特异性免疫功能的影响;MTT方法检测NK细胞活性,小鼠眼内眦静脉丛注射墨汁检测碳粒廓清指数,明确SFP对非特异性免疫功能的影响;取小鼠肿瘤组织做切片,通过H-E染色观察淋巴细胞浸润情况。3.为研究SFP与化疗药联用后对机体毒性、抗肿瘤效果及免疫器官的影响,选用BALB/C小鼠,构建S180皮下实体瘤模型,随机分成对照组(生理盐水)、不同剂量的SFP和环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)单独用药、联合给药组,腹腔注射给药,给药期间记录小鼠体重、摄食饮水量及肿瘤体积变化,观察小鼠生命体征。结束后摘眼球取血检测血常规并解剖小鼠观察主要脏器颜色及形态大小变化,取脾脏、胸腺计算免疫脏器指数,剥离瘤块计算抑瘤率。结果:1.小鼠皮下移植瘤实验表明,给药期间小鼠体重均呈现稳定增长趋势,摄食饮水量在一定范围内平稳波动,生命体征无异常状况,血常规各项指标及解剖后小鼠脏器颜色及形态大小均正常,SFP给药组肿瘤明显减小,由此说明SFP具有较好的体内抗肿瘤活性,而且不影响小鼠的一般状态。2.SFP使免疫脏器指数增加,说明SFP在体内能促进荷瘤小鼠免疫脏器的正常发育;MTT实验和流式结果表明,SFP能促进淋巴细胞增殖,提高CD4+T、CD8+T亚群比例,增加IL-2、IL-4、TNF等细胞因子的含量,从而增强机体特异性免疫功能;SFP能增加碳粒廓清指数,从而提高巨噬细胞的吞噬功能,H-E染色结果表明SFP能募集肿瘤浸润淋巴细胞到瘤组织中。综上所述,SFP能保护并增强荷瘤小鼠免疫系统功能。3.SFP与低剂量CTX(10 mg/kg)联用可以明显缓解CTX所致的骨髓抑制毒性和免疫器官衰退;与中剂量CTX(15 mg/kg)联用对小鼠生命体征、血常规、脏器指数等指标无显著改善;而与高剂量CTX(20 mg/kg)联用则明显增强CTX所致的毒副作用。SFP与各剂量CTX联用能够不同程度地增强抗肿瘤效果,但无统计学意义。结论:1.SFP具有较好的体内抗肿瘤活性,而且不影响小鼠的一般状态。2.SFP能够显著增强荷瘤小鼠的免疫功能,通过促进免疫器官正常发育、调节机体的细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫、促进肿瘤组织T细胞浸润等多途径发挥抗肿瘤免疫调节功能。3.SFP与CTX联用的安全性和有效性,因CTX剂量不同而呈现不同表现。SFP对化疗药物的减毒增效作用尚需进一步明确。
【图文】：

模型图,皮下移植瘤,小鼠腹水,模型

图 1 小鼠腹水瘤和皮下移植瘤模型1.2.3 实验分组与给药1.2.3.1 实验小鼠购买与饲养30 只雌性 BALB/C 小鼠，体重约 18~22 g，在天津市药物研究院 SPF 级动物房饲养，饲养间的温度为 20~26℃，相对湿度为 40%~70%，昼夜相等时间的明暗交替，正常投放充足的饲料，自由饮水，在该条件下饲养 3-5 天使小鼠适应新环境再进行模型构建。1.2.3.2 实验小鼠分组与给药小鼠皮下移植瘤模型构建成功后，选取瘤块形态规则、大小均一的 24只小鼠按体重分层随机分为 4 组，，分别为模型对照组（Control，生理盐水）、阳性对照药胸腺五肽组（TP-5，1 mg/kg）、蚕丝蛋白肽低剂量组（SFP (L)，300mg/kg）、蚕丝蛋白肽高剂量组（SFP (H)，600 mg/kg），每组 6 只小鼠，用棉签蘸取适量 0.2% 品红溶液给小鼠染色编号，编号顺序分别为左上肢、左下肢、右上肢、右下肢、头部、背部，分别代表 1-6。实验采用腹腔注射方式给药，根据小鼠体重配制适宜浓度的药物，每只小鼠腹腔注射 0.2 ml 药物溶液，

曲线,体重变化,荷瘤小鼠,实验小鼠

作用于实验小鼠后，不仅不会减轻小鼠的体重，还具有使表 1 荷瘤小鼠体重变化（mean ± SD，n=6）ay) Control (g) TP-5 (g) SFP (L) (g) S18.91±1.34 18.96±1.29 18.80±0.96 119.49±0.94 20.01±1.35 19.80±1.04 119.79±0.94 20.24±1.23 20.04±0.89 220.09±1.70 20.80±1.64 20.59±1.19 220.01±1.67 20.98±1.66 20.20±1.09 220.33±1.93 21.10±1.46 20.34±1.19 220.70±1.96 21.78±1.59 20.96±1.57 220.93±2.01 21.56±1.88 21.03±1.65 221.46±2.26 21.68±2.16 21.41±1.81 222.14±2.25 22.73±2.36 22.36±1.47 2照组相比无显著性差异（P＞0.05）
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R965

【参考文献】