用于递送表阿霉素的金纳米长循环靶向递送系统的制备及其抗肿瘤作用研究

发布时间：2020-05-13 21:08

【摘要】：前列腺癌是指发生在前列腺上皮的恶性肿瘤,是男性中的第二大癌症,并且是全世界男性癌症死亡的主要原因之一。黑色素瘤是一种源自黑色素细胞,并且是皮肤癌中最恶性的肿瘤,易发生远端转移。目前,临床上最有效的治疗手段主要仍为手术治疗、放疗和化疗等,化疗是目前治疗癌症最有效的手段之一,但其治疗效果不容乐观,主要原因是化疗药物多为广谱性,具有靶向性差,毒副作用大,体内循环时间短等缺点,进而使其临床应用受到了限制。实验目的:根据Sigma受体在前列腺癌和黑色素瘤细胞表面高表达,并能够与其特异性配体茴香酰胺(AA)相结合的特性,通过对能够发生静电相互作用进而装载化疗药物的长循环靶向金纳米递送系统制备方法的探索与优化,制备出一种能够装载表阿霉素的长循环靶向纳米制剂,建立相应化疗药物的含量检测方法,并对最终剂型进行表征,以及体外抗肿瘤作用的相关研究。实验方法:(1)建立表阿霉素的含量检测方法,使用紫外分光光度法或高效液相色谱法检测金纳米制剂中表阿霉素的含量,包括标准曲线的绘制。(2)对装载表阿霉素的金纳米制剂的制备方法进行了探索和优化,包括不同的药质比,孵育时间和孵育温度等,并最终根据其表征及稳定性等确定最佳的制备方法和条件,得到成熟的剂型。(3)对两种装载表阿霉素的金纳米制剂Au NP-PEG5000.EPI和Au NP-PEG5000-AA.EPI进行制备和表征,包括粒径大小、PDI及Zeta电位,采用离心的方法检测表阿霉素的包封率,并对其在4℃0.01 M PBS(制剂制备环境)和37℃含50%FBS的生理盐水(模拟人生理环境)中的稳定性进行考察;考察装载表阿霉素的金纳米制剂在37℃条件下p H敏感的体外药物释放情况。(4)考察金纳米制剂的体外抗肿瘤作用,应用MTT的方法,考察靶向与非靶向金纳米制剂及其对照组对前列腺癌细胞PC-3和黑色素瘤细胞B16的细胞毒性作用;应用荧光显微镜考察靶向与非靶向金纳米颗粒在PC-3和B16细胞中的细胞摄取情况;采用流式细胞术研究靶向与非靶向金纳米制剂对PC-3和B16细胞的诱导凋亡情况,并采用Western Blot对相关凋亡调控因子Caspase 3,Bcl-2以及Bax的表达情况进行考察,确定相关凋亡机制;应用共聚焦显微镜考察靶向与非靶向金纳米制剂在PC-3和B16细胞中的内体逃逸情况。实验结果:(1)绘制了表阿霉素含量标准曲线,在测定浓度范围内线性关系良好。(2)通过对金纳米制剂制备方法的探索和优化,确定最终药质比EPI:Au NPs(w:w)=1:5,孵育温度为45℃,孵育时间为12 h,此时EPI包封率最高,可达到80%左右。(3)对靶向与非靶向金纳米制剂进行表征,粒径大小均在130-160nm之间,PDI在0.22左右,分布均匀,由于表阿霉素带正电,故装载表阿霉素后,其Zeta电位也发生了相应变化,并测得对表阿霉素的包封率可达到80%左右,且在4℃0.01 M PBS和37℃含50%FBS的生理盐水中稳定性良好;体外释放结果显示,金纳米制剂具有p H敏感的药物释放行为,对表阿霉素的缓释作用显著,且在p H 5.5(模拟肿瘤细胞内体环境p H)条件下释放率更高。(4)MTT结果显示,靶向的金纳米制剂对PC-3和B16细胞均表现出显著的杀伤作用;荧光显微镜下可以观察到,靶向的金纳米制剂在PC-3和B16细胞中均有更高的摄取;流式结果显示,靶向的金纳米制剂能够在PC-3和B16细胞中更显著地诱导其凋亡,并且相关凋亡调控因子Caspase 3各组间表达量无显著性差异,而针对Cleaved caspase 3和促凋亡因子Bax,靶向金纳米制剂组均观察到更高的表达,且对于抑制凋亡因子Bcl-2,观察到靶向金纳米组表达最低;共聚焦显微镜的结果可以看出,靶向金纳米制剂组有更多的表阿霉素从细胞内体中逃出,避免其在内体的酸性环境中质子化后被隔离,使药物能够最大限度的发挥作用。本课题制备了一种能够有效装载表阿霉素的长循环金纳米靶向递送系统,能够大大降低表阿霉素对机体其他正常组织和器官的毒副作用。靶向作用能使得药物在肿瘤区域富集,提高药物对肿瘤的杀伤作用。因此,本研究也为靶向递送表阿霉素的临床应用提供了有力的实践依据。
【图文】：

示意图,示意图,化疗药物,靶向

前列腺癌是指发生在前列腺上皮的恶性肿瘤，是男性中的第二大癌症，并且是全世界男性癌症死亡的主要原因之一。黑色素瘤是一种源自黑色素细胞，并且是皮肤癌中最恶性的肿瘤，易发生远端转移。目前，临床上最有效的治疗手段主要仍为手术治疗、放疗和化疗等，化疗是目前治疗癌症最有效的手段之一，但其治疗效果不容乐观，主要原因是化疗药物多为广谱性，具有靶向性差，毒副作用大，体内循环时间短等缺点，进而使其临床应用受到了限制。实验目的：根据 Sigma 受体在前列腺癌和黑色素瘤细胞表面高表达，并能够与其特异性配体茴香酰胺（AA）相结合的特性，通过对能够发生静电相互作用进而装载化疗药物的长循环靶向金纳米递送系统制备方法的探索与优化，制备出一种能够装载表阿霉素的长循环靶向纳米制剂，建立相应化疗药物的含量检测方法，并对最终剂型进行表征，以及体外抗肿瘤作用的相关研究。

表阿霉素

开了临床的应用前景，也提高了患者的生存质量概述EPI）又称表柔比星，是阿霉素（DOX）的同分抗肿瘤化疗药，对细胞周期有非特异性，对多种有蒽环，属蒽环类药物，因此，其临床应用往往。EPI 的作用机制为可直接作用于肿瘤细胞的 D，干扰细胞的转录过程，进而影响 mRNA 的生。此外，EPI 对拓朴异构酶Ⅱ也有抑制作用，与效，且对心脏的毒性相对较小。尽管近年来以 E于晚期癌症治疗，然而，，EPI 的非靶向性仍会引存质量下降，很多患者常常因为无法耐受而被迫
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R943;R96

【相似文献】