无稳定剂修饰的汉防己甲素PLGA纳米粒制备及体外评价

发布时间：2020-05-31 23:28

【摘要】：目的:制备无稳定剂修饰的汉防己甲素PLGA纳米粒,研究其理化性质及细胞毒和细胞摄取特性。方法:以聚乳酸-羟基醋酸共聚物(PLGA)为载体材料,采用无稳定剂修饰的纳米沉淀法制备汉防己甲素纳米粒;通过单因素试验考察不同制备工艺对纳米粒理化性质的影响;通过载药量、包封率、累积释药量等指标考察其载药特性;采用MTT比色法检测其对人肺腺癌细胞株A549的细胞毒性;采用共聚焦显微镜技术考察其细胞摄取特性。结果:无稳定剂修饰的汉防己甲素PLGA纳米粒平均粒径169.3 nm,与有稳定剂的汉防己甲素PLGA纳米粒相比外观无明显改变。在一定范围内,随着PLGA用量的增加,纳米粒的粒径呈上升趋势;随着投药量的增加,纳米粒的载药量显著增加,包封率下降。在pH7.4的释放介质中,纳米粒释慢释药,96 h累积释药率60.44%。细胞毒试验显示,当培养时间为8 h时,汉防己甲素组的细胞毒性大于汉防己甲素纳米粒组;当培养时间延长至24 h时,汉防己甲素纳米粒组的细胞活性明显低于纯药物组;高剂量的空白纳米粒组始终表现较低的细胞毒性。激光共聚焦电镜断层扫描显示汉防己甲素纳米粒能够较好的被细胞摄取。结论:制备的无稳定剂修饰的汉防己甲素PLGA纳米粒大小均一,包封率高,体外释药表现出较好的缓释效果,易被细胞摄取,对A549细胞的增殖有明显的抑制作用。
【图文】：

纳米粒,稳定剂,照片,悬液

－ＰＬＧＡＮＰｓ和２％ＰＶＡ－Ｔｅｔ－ＰＬＧＡＮＰｓ悬液适量，稀释，滴加在硅胶晶板上自然挥干，ＱｕｏｒｕｍＱ１５０ＥＳ喷金仪真空条件喷金，扫描电镜观察形态结构（图１）。（２）ＴＥＭ样品制备：取Ｔｅｔ－ＰＬＧＡＮＰｓ和２％ＰＶＡ－Ｔｅｔ－ＰＬＧＡＮＰｓ悬液适量，稀释，滴加在覆盖碳膜的铜网上，用２．０％的磷钨酸钠液负染，透射电镜观察形态结构（图２）。ａ．无稳定剂修饰；ｂ．２％ＰＶＡ修饰ａ．ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒ－ｆｒｅｅ；ｂ．２％ＰＶＡ图１载药ＰＬＧＡ纳米粒的ＳＥＭ照片Ｆｉｇ１ＳＥＭｉｍａｇｅｓｏｆＰＬＧＡｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｌｏａｄｉｎｇｄｒｕｇ２．２．２Ｚｅｔａ电位和粒径分析分别取Ｔｅｔ－ＰＬＧＡＮＰｓ和２％ＰＶＡ－Ｔｅｔ－ＰＬＧＡＮＰｓ悬液适量，稀释，激光散射法测定其粒径及粒径分布，并检测Ｚｅｔａ电位（图３）。·１３７６·中国医院药学杂志２０１５年８月第３５卷第１５期ＣｈｉｎＨｏｓｐＰｈａｒｍＪ，Ａｕｇ２０１５，Ｖｏｌ３５，Ｎｏ．１５

纳米粒,稳定剂,照片

ａ．无稳定剂修饰；ｂ．２％ＰＶＡ修饰ａ．ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒ－ｆｒｅｅ；ｂ．２％ＰＶＡ图２载药ＰＬＧＡ纳米粒的ＴＥＭ照片Ｆｉｇ２ＴＥＭｉｍａｇｅｓｏｆＰＬＧＡｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｌｏａｄｉｎｇｄｒｕｇ图３载药ＰＬＧＡ纳米粒（ａ．无稳定剂修饰；ｂ．２％ＰＶＡ修饰）的粒径分布图Ｆｉｇ３ＳｉｚｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｂｙｉｎｔｅｎｓｉｔｙｏｆＰＬＧＡｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｌｏａｄｉｎｇｄｒｕｇ（ａ．ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒ－ｆｒｅｅ；ｂ．２％ＰＶＡ）２．３单因素试验考察无稳定剂修饰的ＰＬＧＡＮＰｓ的制备工艺从ＰＬＧＡ用量、乙醇和纯化水体积比两方面对无稳定剂修饰的ＰＬＧＡ纳米粒制备工艺进行考察。２．４Ｔｅｔ－ＰＬＧＡＮＰｓ稳定性考察Ｔｅｔ－ＰＬＧＡＮＰｓ悬液离心收集纳米粒，，重分散于ｐＨ７．４ＰＢＳ缓冲液中，室温保存，通过测量０，３，６，９，１２ｄ不同时间点粒径对其稳定性进行考察。２．５Ｔｅｔ－ＰＬＧＡＮＰｓ包封率和载药量测定２．５．１色谱条件色谱柱：ＲＰ１８－ｓｅｌｅｃｔＢ（１２５ｎｍ×４ｍｍ）；流动相：水－乙腈－三乙胺（７００∶３００∶１）（调ｐＨ７．４）；流速：０．７ｍｌ·ｍｉｎ－１；进样量：２０μｌ；柱温：３５℃；紫外检测器；检测波长：２８０ｎｍ。２．５．２包封率及载药量的测定精密称取一定量的Ｔｅｔ－ＰＬＧＡＮＰｓ冻干粉，以乙腈溶解，经０．２μｍ微孔滤膜过滤，取滤液，ＨＰＬＣ法测定Ｔｅｔ的含量，并按下式（１）（２）计算包封率（ＥＥ％）

【参考文献】