搭载阿霉素与p53基因的支链状聚乙烯亚胺—环糊精超分子体系抑制HeLa细胞生长的研究

发布时间：2017-03-26 21:00

  本文关键词：搭载阿霉素与p53基因的支链状聚乙烯亚胺—环糊精超分子体系抑制HeLa细胞生长的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：抗肿瘤药物通常存在半衰期短、易产生耐药性等局限。传统的化疗方法要达到一定的治疗效果往往需要在短时间内频繁给药,导致全身性血药浓度高、毒副作用大,易产生耐药性等问题。基因治疗是将目的基因通过载体系统导入机体细胞或组织,并表达出有疗效作用的产物,在体内发挥治疗疾病的目的。由于基因与药物协同治疗具有疗效好,通过给与特定的基因,可以降低化疗药物的剂量,减少其毒副作用,逆转肿瘤的多耐药现象,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。基因治疗的关键的技术是建立高效、安全、低副作用的基因载体。聚乙烯亚胺(PEI)作为最典型的阳离子聚合物之一,目前已经广泛用作基因转染的载体,但其细胞毒性大,血液相容性差等缺点严重制约了其进一步的应用。并且,直接体内应用会导致红细胞的聚集,与血液中的白蛋白等发生非特异性结合,导致聚合体的形成,对人体有巨大伤害。所以,PEI一般不单独做为基因药物的载体。因此,对PEI进行修饰是极其必要的。p-环糊精由于其特殊的结构使其在水溶液中可以识别和包结一系列的底物。 由葡萄糖单元构成,使其成为超分子化学中一种便宜易得、生物相容性良好的重要主体分子。并在催化、自组装、分子识别、药物运输等领域应用广泛。本研究选取β-环糊精为改性材料,与支链状BPEI连接反应形成BPEI-β-CD复合材料。合成的复合材料具有毒性低、安全性高和转染效率好等特点。结构中p-环糊精上的羟基可以改善载体的细胞膜的黏附作用。抑癌基因p53将通过静电作用被BPEI吸附。同时,将抗肿瘤药物doxorubicin(DOX)与AD-COOH反应形成AD-DOX,其可以与空腔的p-CD通过主客体反应而结合。这样,载体材料BPEI-β-CD将同时搭载上抑癌基因p53与抗肿瘤药物DOX,从而实现基因与药物的协同治疗。在此研究中,我们利用基于BPEI-β-CD的释放体系重点考察了抗肿瘤药物DOX与抑癌基因p53分别单独作用和同时作用的效果对比。最后发现,DOX与p53虽然同时进入HeLa细胞,但是两者在抑制HeLa细胞的增殖上存在先后次序,具有协同治疗的效果,且这种结果要优于其他组分的情况。可见这种新的抗癌药物递送体系能有效控制两种物质的分步释放,能在微酸性肿瘤病灶部位释放两种物质从而协同抑制肿瘤细胞的生长,提高肿瘤治疗效率。
【关键词】：聚乙烯亚胺 β-环糊精 阿霉素 p53抑癌基因 控制释放 协同治疗
【学位授予单位】：湖南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 本文所用英文缩写词表11-12
• 第1章 绪论12-23
• 1.1 引言12
• 1.2 逆转肿瘤多药耐药的方法12-14
• 1.2.1 纳米药物载体13
• 1.2.2 RNA干扰(RNAi)技术13
• 1.2.3 基因与药物协同治疗13-14
• 1.3 纳米药物载体在肿瘤治疗中的发展及应用14-15
• 1.3.1 药物搭载体系的发展14
• 1.3.2 纳米药物控释系统的优势14-15
• 1.4 基因与药物协同治疗在肿瘤治疗中的发展及应用15-16
• 1.5 聚乙烯亚胺在肿瘤治疗中的发展及应用16-18
• 1.6 环糊精在肿瘤治疗当中的作用18-19
• 1.6.1 环糊精简介18
• 1.6.2 环糊精的应用18-19
• 1.7 p53抑癌基因以及阿霉素DOX在肿瘤治疗中的应用19-20
• 1.7.1 p53抑癌基因在肿瘤治疗中的应用19-20
• 1.7.2 阿霉素DOX在肿瘤治疗当中的应用20
• 1.8 本论文拟开展的工作20-23
• 第2章 控释体系的制备及其表征23-33
• 2.1 引言23
• 2.2 实验部分23-26
• 2.2.1 试剂与仪器23-24
• 2.2.2 基因药物载体刺激响应型控释体系的合成24-25
• 2.2.3 AD-DOX的合成25
• 2.2.4 BPEI-β-CD的合成25
• 2.2.5 p53/BPEI-β-CD/AD-DOX复合体系的合成25-26
• 2.3 实验结果和讨论26-31
• 2.3.1 控释载体紫外表征26
• 2.3.2 控释载体傅立叶红外光谱表征26-28
• 2.3.3 控释载体质子核磁共振(~1H-NMR)表征28-29
• 2.3.4 控释载体表面电位与粒径表征29-31
• 2.4 小结31-33
• 第3章 控释体系基因载体的研究33-45
• 3.1 前言33
• 3.2 实验部分33-38
• 3.2.1 仪器与试剂33-34
• 3.2.2 细菌的培养以及质粒的提取34-35
• 3.2.3 细胞的培养35
• 3.2.4 凝胶电泳实验35
• 3.2.5 基因转染实验以及载体毒性实验35-36
• 3.2.6 细胞内示踪实验36-38
• 3.2.7 DOX的体外释放实验38
• 3.3 实验结果和讨论38-44
• 3.3.1 DNA凝胶电泳实验38-39
• 3.3.2 基因转染实验以及载体毒性实验39-41
• 3.3.3 细胞内示踪实验41-43
• 3.3.4 DOX体外释放结果分析43-44
• 3.4 小结44-45
• 第4章 阿霉素和p53联用对HeLa细胞增殖的影响45-56
• 4.1 前言45-46
• 4.2 实验46-49
• 4.2.1 试剂与仪器46
• 4.2.2 细胞形态及台盼蓝染色实验46-47
• 4.2.3 细胞毒性MTT实验47-48
• 4.2.4 流式细胞计数实验48-49
• 4.2.5 RTCA细胞增殖与毒性实时监控实验49
• 4.3 实验结果和讨论49-55
• 4.3.1 细胞形态及台盼蓝染色结果分析49-50
• 4.3.2 细胞毒性MTT实验结果分析50-52
• 4.3.3 流式细胞计数实验结果分析52-53
• 4.3.4 RTCA细胞增殖与毒性实时监控结果分析53-55
• 4.4 小结55-56
• 结论56-58
• 参考文献58-66
• 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录66-67
• 致谢67

  本文关键词：搭载阿霉素与p53基因的支链状聚乙烯亚胺—环糊精超分子体系抑制HeLa细胞生长的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：269337