人尿液中5-羟吲哚乙酸及人血浆中吉非替尼的检测方法研究

发布时间：2020-06-11 08:00

【摘要】：5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)是单胺类中枢神经递质的一种,是5-羟色胺(5-HT)生成的无活性的酸性代谢终产物,最终从尿液中排出。5-HIAA是人体内重要的神经递质代谢产物,增高或降低都会间接反映体内某些病理改变。在转移性类癌患者尿液中5-HIAA的水平明显升高。临床上将5-HIAA的过度分泌作为类癌瘤的最为特异性的生化指征。检测24小时尿液中5-HIAA的含量可用于类癌综合征病情的监测及治疗疗效的评估。类癌归属于神经内分泌肿瘤(neuroendocrine neoplasms,NENs),NENs是一类起源于干细胞且具有神经内分泌标记物、能够产生生物活性胺或多肽激酶的肿瘤。其中,胃肠胰神经内分泌肿瘤(gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasms,GEP-NENs)最为多见。在治疗胃肠胰神经内分泌肿瘤的药物研究中,一些新药例如:吉非替尼以及沙利度胺等发挥了一定的效果。本课题对人尿液中5-HIAA和人血浆中吉非替尼的检测方法进行了研究。本论文共分为五章,主要内容包括:第一章介绍了课题研究的意义,类癌的发病特点及诊断,5-HIAA的合成代谢,5-HIAA的常规分析方法,类癌及分子靶向药物治疗进行了综述。第二章建立人尿液中5-HIAA的超高效液相色谱-质谱联用检测方法,并进行方法学验证。该方法使用的色谱柱为Waters HSS T3(100×2.1 mm,1.8μm),质谱条件为电喷雾离子源(ESI),选择负离子提取方式检测。采用人工尿液UR-N-CONTROL LEVEL 2 NP配制标准曲线,质控样品采用人工尿液和天然尿液配制而成,以5-羟吲哚乙酸的同位素氘标记物为内标,尿液样品采用乙腈进行稀释处理后采用UPLC-MS/MS检测。该方法测定的5-羟吲哚乙酸在0.0500至50.0μg/mL范围内线性良好,r~2≥0.9896,最低定量限(LLOQ)为0.0500μg/mL。5-羟吲哚乙酸批内、批间准确度偏差在-10.7%~4.8%之间,精密度(CV)≤8.4%。平均回收率为100.3%~102.3%。该方法专属性强、灵敏度高,快速。人工尿液和天然尿液在定量分析时无差异,适合于人尿液中5-羟吲哚乙酸的浓度测定。第三章晚期非胰腺来源神经内分泌瘤患者24小时尿液中5-HIAA浓度的测定。本课题建立的人尿液中5-HIAA浓度的检测方法已应用于新一代抗肿瘤药物治疗晚期非胰腺来源神经内分泌肿瘤患者的III期临床研究样本的检测。目前已完成40例患者24小时尿液中5-HIAA基线浓度的检测,检出总量在0.12 37.8 mg范围内,其中7例患者24小时尿液中5-HIAA的总量高于10 mg,15例患者24小时尿液中5-HIAA的总量低于2 mg。第四章建立人血浆中吉非替尼的超高效液相色谱-质谱联用检测方法,并进行方法学验证。该方法使用的色谱柱为Waters BEH C18色谱柱(100×2.1 mm,1.7μm),质谱条件为电喷雾离子源(ESI),选择正离子提取方式检测,以吉非替尼-d3为内标,血浆样品采用乙腈进行蛋白沉淀处理后采用UPLC-MS/MS检测。该方法测定的吉非替尼的标准曲线范围为5.00至3000 ng/mL,浓度与峰面积比的关系可用回归方程:峰面积比=A×浓度~2+B×浓度+C来表示,r~2≥0.9962,最低定量限(LLOQ)为5.00 ng/mL。吉非替尼批内、批间准确度偏差在-3.8%~4.0%之间,精密度(CV)≤11.2%。平均回收率为98.9%~101.8%。吉非替尼储备液和血浆稳定性结果良好。该方法的准确度、精密度良好,已应用于临床人血浆样本中吉非替尼浓度的检测。第五章对全文进行总结与展望。
【图文】：

代谢途径,工程硕士学位,交通大学

海交通大学工程硕士学位论文第一章.3 5-HIAA 的合成代谢色氨酸（TRP）在色氨酸羟化酶（TPH）的作用下生成 5-羟基色氨酸（5-HTP-HTP 在芳香族氨基酸脱羧酶（AAAD）的作用下脱去羧基生成 5-HT，5-HT 在氧化酶（MAO）作用下生成 5-HIAA，代谢途径见图 1-1。在这个代谢途径中，TRP 摄入量不足或者代谢途径中任何一个酶缺失或是异，都将导致 5-HIAA 的合成紊乱和生成障碍。

色谱图,样品,内标,空白

C2 仅含 5-HIAA ULOQ 浓度（不含内标）的人工尿液样品中内标检测通道色谱图 2-2 选择性评价样品色谱图：（A）空白人工尿液样品，（B）仅含内人工尿液样品，（C）仅含 5-HIAA ULOQ 浓度（不含内标）的人工尿液品ig.2-2 Chromatograms of selectivity evaluation (A) Blank artificial urine k artificial urine with internal standard (C) Blank artificial urine spiked wit5-HIAA at the ULOQ without internal standard质效应和基质效应因子察是否存在对定量分析有影响的基质效应，实验使用已进行 5-HIAA 本的 6 个个体的空白尿液样品，加样配制成各自 5-HIAA 实测浓度值 2 至样品，每个个体基质样品 3 个重复，，以测定其准确度。6 个个体基质的见表 2-2。表 2-2 6 个个体的人空白尿液样品选择性结果（n=3）Table 2-2 Six individual blank human urine assessment (n=3)基质编号 1 2 3 4 5 6
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R730.43;R969.1;O657.63

【参考文献】