组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）逆转肿瘤细胞上皮—间质转化（EMT）的作用及初步机制研究

发布时间：2017-03-27 18:00

  本文关键词：组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）逆转肿瘤细胞上皮—间质转化（EMT）的作用及初步机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景及目的:组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)被认为是一种具有良好前景的抗肿瘤药物并且部分已经进入临床或上市,该类药物发挥抗肿瘤作用主要与调控肿瘤相关基因的转录有关。其中,曲古抑菌素A(TSA)是一种经典的HDACIs类药物,它能够以非竞争性的、可逆的方式抑制组蛋白去乙酰化酶(HDACs)。有文献报道,TSA能够在多种恶性肿瘤细胞如结直肠瘤、前列腺瘤、儿童神经母细胞瘤、皮肤瘤细胞中发挥抑制增殖和诱导分化的作用,且其中的机制已相对清晰;也有研究观察到TSA能够在前列腺恶性肿瘤细胞中发挥抗侵袭、转移的作用,但相关的进一步研究甚少。而众所周知,肿瘤细胞的上皮间质转化(EMT)是促进肿瘤细胞侵袭转移的重要因素。临床数据也显示,一些EMT相关的调控因子也与肿瘤的侵袭转移及不良预后密切相关。那么,TSA是否能够逆转肿瘤细胞EMT进而发挥抗侵袭转移作用呢?其中可能的机制又是如何呢?本研究首先从分子水平上考察了TSA对肿瘤细胞EMT相关标志物表达的影响,接着直接从功能上考察TSA对肿瘤细胞侵袭和转移能力的影响。鉴于转录因子Slug对肿瘤细胞EMT具有重要的促进作用,本研究将重点关注Slug,以Slug为中心来初步探讨TSA逆转肿瘤细胞EMT的机制。该研究将为HDACIs类药物在临床上发挥抗肿瘤作用提供了一些新的参考。研究方法:本研究主要的从EMT相关标志物、侵袭转移功能、EMT相关转录因子、染色质水平这四个层次考察TSA逆转肿瘤细胞EMT的作用及其机制。1.采用Real Time PCR和Western Blotting技术检测TSA对SW480、PC3细胞中E-cadherin、Vimentin m RNA和蛋白表达的影响,再用激光共聚焦显微镜检测TSA对两种肿瘤细胞膜上E-cadherin表达的影响。2.采用MTT实验检测TSA对SW480、PC3细胞增殖的影响,确定对两种细胞增殖无明显影响的TSA浓度和处理时间点;再用Transwell侵袭和转移实验考察TSA对两种肿瘤细胞侵袭和转移能力的影响。3.利用Real Time PCR和Western Blotting技术检测TSA对SW480、PC3细胞内转录因子Slug m RNA和蛋白表达的影响,再用Western Blotting检测TSA处理后Slug、E-cadherin蛋白表达随时间点的变化情况。最后将Slug质粒转染到SW480和PC3细胞中,同时在转染的基础上用TSA处理或不处理后,检测细胞中Slug、E-cadherin和Vimentinm RNA和蛋白表达的变化。4.采用CHIP实验检测HDAC1,HDAC2,HDAC3,HDAC4与Slug基因启动子的结合情况。研究结果:1.在SW480和PC3两种肿瘤细胞中,TSA能够在m RNA水平和蛋白水平上调上皮性标志物E-cadherin的表达,而下调间质性标志物Vimentin的表达;另外,激光共聚焦检测能够直观的观察到TSA上调SW480和PC3细胞膜上的E-cadherin表达。2.MTT实验结果得到,在48 h内,100 n M的TSA对SW480和PC3细胞增殖无明显影响;在Transwell侵袭和转移实验中,100 n M的TSA处理两种细胞48 h后能够明显减少其侵袭、转移的肿瘤细胞数。3.在SW480和PC3两种肿瘤细胞中,TSA能够在m RNA水平和蛋白水平下调转录因子Slug的表达;且TSA处理肿瘤细胞后,Slug蛋白表达明显降低的时间点先于E-cadherin蛋白表达明显增加的时间点;过表达Slug质粒能够在m RNA水平和蛋白水平引起E-cadherin的下调和Vimentin的上调,而在过表达Slug质粒的基础上用TSA处理则能够逆转这种作用。4.经TSA处理后,SW480和PC3细胞中HDAC1和HDAC2与Slug基因启动子结合增加,而HDAC1和HDAC2在细胞内的总表达量无变化。研究结论及意义:1.TSA能够逆转肿瘤细胞EMT且能减弱肿瘤细胞的侵袭转移能力,该研究首次确认了组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA逆转肿瘤细胞EMT的作用。2.TSA能够下调肿瘤细胞转录因子Slug的表达且能通过诱导转录因子Slug下调而逆转EMT。该研究初步探讨了其中可能的机制,为HDACIs的临床应用提供了一个参考。3.组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA能够引起HDAC1和HDAC2在Slug基因启动子上结合增多。提示了一种新的现象:HDACIs可能引起HDACs在某些特定基因的启动子上结合增加,从而抑制这些基因的表达。
【关键词】：组蛋白去乙酰化酶抑制剂 曲古抑菌素A 上皮细胞间质化
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 缩略词表9-10
• 1 绪论10-16
• 1.1 组蛋白去乙酰化酶抑制剂10-11
• 1.2 曲古抑菌素A（TSA）的抗肿瘤作用11-12
• 1.3 EMT与肿瘤侵袭转移12-13
• 1.4 EMT相关转录因子13-14
• 1.5 本研究的意义及创新性14-15
• 1.6 研究的主要技术路线15-16
• 2 曲古抑菌素A（TSA）逆转肿瘤细胞EMT的作用16-32
• 2.1 材料及仪器16-20
• 2.2 实验方法20-24
• 2.3 实验结果24-30
• 2.4 讨论与小结30-32
• 3 曲古抑菌素A（TSA）逆转肿瘤细胞EMT机制的初步研究32-43
• 3.1 材料及仪器32-34
• 3.2 实验方法34-36
• 3.3 实验结果36-41
• 3.4 讨论与小结41-43
• 4 结论与展望43-45
• 4.1 结论43-44
• 4.2 展望44-45
• 参考文献45-49
• 致谢49-50
• 附录50

【共引文献】

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  本文关键词：组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）逆转肿瘤细胞上皮—间质转化（EMT）的作用及初步机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：270780