异烟肼和利福平联用致原卟啉Ⅸ积聚造成肝损伤的机制研究

发布时间：2020-06-18 11:50

【摘要】：异烟肼和利福平是世界卫生组织推荐的临床一线抗结核病治疗药物,具有疗效高,口服方便,价格低廉等优点。但是异烟肼和利福平单独使用或联合应用均具有一定的肝脏毒性,长期服用可能会造成药源性肝损伤。目前对于异烟肼和利福平诱导产生肝脏毒性的研究很多,但是抗结核病药物致肝损伤的具体机制并没有得到完全的论述。原卟啉Ⅸ是一种内源性的肝毒性物质,大剂量的原卟啉Ⅸ具有一定的肝毒性,可以导致胆汁栓塞型肝损伤。我们实验证实异烟肼和利福平单独用药可在体内诱导原卟啉Ⅸ的积聚,产生肝毒性作用,二者联合用药则可加剧原卟啉Ⅸ积聚,并认为原卟啉Ⅸ的积聚与孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)的激活有关。亚铁螯合酶是血红素生物合成途径的最后一个关键酶,它可以催化二价铁离子嵌入原卟啉Ⅸ环内生成亚铁血红素。抑制此酶的活性,将使原卟啉Ⅸ转化为亚铁血红素的能力下降,从而导致原卟啉Ⅸ在细胞中积聚。我们实验证实异烟肼可在体内外层面上对亚铁螯合酶产生抑制作用。推测异烟肼的原卟啉Ⅸ积聚造成肝损伤的机制与亚铁螯合酶的抑制有关。为异烟肼和利福平的肝毒性作用机制提出了一个新的思路。本课题主要分为两个部分:第一部分孕烷X受体介导的异烟肼和利福平肝毒性的研究通过建立异烟肼,利福平处理C57BL/6野生型小鼠的动物模型,证明了异烟肼和利福平单独用药可在体内产生肝毒性作用,在肝脏中诱导原卟啉Ⅸ的积聚,二者联合用药则可加剧原卟啉Ⅸ积聚,使肝损伤情况进一步加重。从体内体外两个方面探讨原卟啉Ⅸ积聚与激动PXR的关系,体内使用利福平大剂量腹腔注射的方法诱导小鼠PXR,体外使用HepG2细胞,异烟肼,利福平加药处理。通过Western blot方法检验CYP3A4蛋白表达量,反映出PXR的表达量。结果证明原卟啉Ⅸ的积聚和PXR的激动呈相关关系。第二部分异烟肼通过对亚铁螯合酶的抑制诱导肝损伤通过异烟肼灌胃的方式建立昆明种小鼠异烟肼诱导肝损伤的动物模型。证明异烟肼可以明显诱导小鼠肝损伤,小鼠肝组织中原卟啉Ⅸ含量呈剂量、时间依赖型增长。通过使用高效液相色谱法检测原卟啉锌含量判断亚铁螯合酶活性,体外使用HepG2细胞,异烟肼处理后在荧光倒置显微镜观察原卟啉Ⅸ荧光的方法,证明异烟肼可在体内体外明显抑制亚铁螯合酶的活性。计算机结构对接模拟显示异烟肼与亚铁螯合酶二聚体接口结合,进一步证明异烟肼本身对于亚铁螯合酶起到抑制作用。异烟肼对亚铁螯合酶活性的直接抑制,导致原卟啉Ⅸ在肝脏中的积聚可能是异烟肼造成的肝损伤原因。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R965

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