光谱法研究头孢丙烯与牛血清白蛋白的相互作用

发布时间：2020-09-12 12:12

　　 目的:研究头孢丙烯(CE)与牛血清白蛋白(BSA)之间的相互作用。方法:采用荧光猝灭光谱法、紫外光谱法和同步荧光光谱法,研究289、299、309 K温度下作用50 min时CE与BSA的相互作用。根据Stern-Volmer方程计算动态猝灭常数(KSV)和动态猝灭速率常数(Kq),Lineweaver-Burk方程计算静态猝灭结合常数(KLB)和紫外吸收光谱图判断猝灭类型;根据双对数方程计算结合常数(Kb)和结合位点数(n);根据热力学公式计算焓变(ΔH)熵变(ΔS)和吉布斯自由能变(ΔG);根据Hill方程计算Hill系数(nH)。结果:3个温度下的BSA荧光强度随着CE浓度升高而有规律地降低;KSV、Kq、KLB、Kb、n和nH均随着温度升高而降低;ΔG0,ΔH0,ΔS0;n约等于1;nH小于1。结论:CE对BSA荧光产生静态猝灭,二者间具有一定的结合作用;其反应是一个自发的放热过程,主要结合力为氢键和范德华力,结合位点主要位于亚螺旋域ⅡA;CE对结合反应产生负协同作用,对BSA构象不产生影响;结合位点更接近于酪氨酸。
【部分图文】：

始x朣V减小，正好与静态猝灭机制一致。2.3.2Lineweaver-Burk方程若CE对BSA为静态猝灭，应符合Lineweaver-Burk方程[7-9]：（F0－F）－1＝F0－1+（KLBF0[c]）－1，式中，KLB为静态猝灭结合常数。以（F0－F）－1对[c]－1作不同温度下的Lineweaver-Burk曲线。不同温度下FCE对BSA荧光猝死的Lineweaver-Burk曲线见图3，Lineweaver-Burk方程及相关参数见表2。由图3可知，随着温度的升高，直线斜率逐渐增大，则KLB逐渐下降，这与因静态猝灭方式而形成的复合物随温度升高图1289K温度下CE-BSA体系的荧光猝灭光谱图Fig1FluorescencequenchingspectrogramofCE-BSAsys-temat289K180016001400120010008006004002000300320340360380400420440波长，nm光强度荧1↓121.451.401.351.301.251.201.151.101.051.000.950.00.51.01.52.02.53.0[c]×10－6mol/LF0/F289K299K309K图2不同温度下CE-BSA体系的Stern-Volmer曲线Fig2Stern-VolmercurvesofCE-BSAsystematdifferenttemperatures20181614121086420051015202530354045[c]－1×10－5mol－1·L－1（F0/F）－1×01－3309K299K289K图3不同温度下CE-BSA体系的Lineweaver-Burk曲线Fig3Lineweaver-BurkcurvesofCE-BSAsystematdiffer-enttemperatures··4361

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本文编号：2817617