玉米高F值寡肽的制备及生理功能研究

发布时间：2017-04-02 06:19

  本文关键词：玉米高F值寡肽的制备及生理功能研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：玉米黄粉蛋白是湿法生产玉米淀粉过程中产生的一种下脚料,含有60%以上蛋白质,由于其口感不佳目前主要应用于饲料,利用价值不高,通过酶解法水解玉米黄粉可制备高F值混合寡肽,高F值混合寡肽具有抗疲劳、解酒、治疗肝性脑病等生物活性。本实验利用耐高温淀粉酶对玉米黄粉进行去淀粉处理,利用单因素实验和响应面实验探究了最佳水解条件为:pH 6.0,温度65℃,底物浓度为100 g/L,E/s为110 U/g,作用时间为60 min,在此条件下玉米黄粉中总糖含量减少157.333 mg/g,模型的预期值为154.503 mg/g。实验采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶三种酶复合法水解预处理后的玉米黄粉,制得寡肽混合物。利用自动氨基酸分析仪,分析所制备寡肽混合物中各氨基酸含量,计算F值为28.40。本实验研究了高F值混合寡肽对小麦生长方面的影响。当处理浓度为10μg/mL时,最适合小麦生长。这时小麦叶片的SOD活性比对照组高了9.43%,POD活性高了24.00%,CAT活性高了39.13%。可溶性糖含量高了83.32%。叶绿素a的含量高了118.52%,总叶绿素的含量高了52.63%。小麦植株鲜重重了40.00%,饱和鲜重重了28.03%,干重重了23.81%,相对含水量高了10.65%。说明高F值混合寡肽在一定程度上促进了小麦的增长。本实验将制备的高F值混合寡肽,经Sephadex G-25、SephadexG-15、CM Sepharose FF凝胶分离,选取最优的分离方法SephadexG-15凝胶过滤。通过调整柱子的规格、洗脱流速、上样浓度和上样量,最终将高F值混合寡肽分为3个组分P1、P2、P3。测得3种组分的分子量范围2392 u、1516 u、265 u左右。实验对分离得到的三种组分与高F值混合寡肽功能比较发现,组分P3和高F值混合寡肽在醒酒作用及抗疲劳作用的生活指标上没有差异。本实验对组分P3采用高效液相色谱分析,将样品P3用超纯水溶解,12000 r/min离心10 min,取上清;系统:HPLC-U 3000;色谱柱:Zorbax SB-C18(4.6×250μm);进样体积:10μL;平衡缓冲液:5%的乙腈;洗脱缓冲液:5%的乙腈;流速:0.6 mL/min;检测:220 nm。得到两种组分A和B。并通过质谱分析得到组分A和B的一级结构为甘氨酸-缬氨酸-亮氨酸(异亮氨酸)(Gly-Val-Leu(Ile))和甲硫氨酸-亮氨酸(异亮氨酸)(Met-Leu(Ile))。一级结构中存在的亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸为支链氨基酸,具有保肝护肝的作用,据研究表明,甲硫氨酸和甘氨酸同样具有保护肝脏的作用,与实验结果相对应。通过实验为玉米黄粉制备高F值混合寡肽及分离纯化,研究高F值混合寡肽的醒酒、抗疲劳和保肝护肝作用及其对小麦生长的影响提供了实验基础。
【关键词】：玉米黄粉 高F值寡肽 复合酶解 分离纯化 醒酒 抗疲劳 保肝护肝 小麦生长
【学位授予单位】：济南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R943;R96
【目录】：

• 研究生导师简介5-11
• 摘要11-13
• ABSTRACT13-15
• 主要符号表15-17
• 第一章 前言17-23
• 1.1 高F值混合寡肽的定义17
• 1.2 高F值混合寡肽的制备17
• 1.3 玉米黄粉的来源和组成17-18
• 1.4 生物活性肽的分离纯化技术18-20
• 1.4.1 电泳技术18-19
• 1.4.2 层析技术19-20
• 1.4.3 膜分离技术20
• 1.4.4 多种方法结合使用分离纯化生物活性肽20
• 1.5 高F值混合寡肽的生理功能20-22
• 1.5.1 辅助治疗肝性脑病21
• 1.5.2 抗疲劳作用21
• 1.5.3 解醉酒功能21
• 1.5.4 改善苯丙酮尿症21-22
• 1.5.5 延长细胞自然寿命22
• 1.6 展望22-23
• 第二章 玉米黄粉蛋白的去淀粉处理23-38
• 2.1 实验材料与仪器设备23-24
• 2.2 实验方法24-28
• 2.2.1 蛋白酶活测定方法24-26
• 2.2.2 耐高温淀粉酶酶活测定26
• 2.2.3 总糖含量的测定26
• 2.2.4 玉米黄粉中总糖含量的测定26-27
• 2.2.5 玉米黄粉中蛋白含量测定27
• 2.2.6 醇溶蛋白的提取27
• 2.2.7 耐高温淀粉酶水解玉米黄粉最优条件的确定27-28
• 2.3 结果与分析28-37
• 2.3.1 蛋白酶活测定结果28-29
• 2.3.2 玉米黄粉中总糖含量29
• 2.3.3 玉米黄粉中蛋白含量29
• 2.3.4 两种预处理方法蛋白回收率的计算29-30
• 2.3.5 耐高温淀粉酶水解最优条件的确定30-37
• 2.4 结论37-38
• 第三章 玉米高F值寡肽制备及生理功能研究38-59
• 3.1 玉米高F值混合寡肽对小麦生长影响的实验材料与仪器设备39-41
• 3.2 高F值寡肽对小麦生长影响的实验方法41-46
• 3.2.1 玉米高F值混合寡肽的制备41
• 3.2.2 玉米高F值混合寡肽对小麦生长影响实验41-46
• 3.2.3 实验数据处理46
• 3.3 玉米高F值混合寡肽对小麦生长的影响的实验结果46-51
• 3.3.1 混合寡肽F值46-47
• 3.3.2 高F值混合寡肽对小麦叶片SOD、POD、CAT活性的影响47-48
• 3.3.3 高F值混合寡肽对小麦叶片叶绿素含量影响48-49
• 3.3.4 高F值混合寡肽对小麦叶片中可溶性糖含量的影响49-50
• 3.3.5 高F值混合寡肽对小麦叶片相对含水量和干物质量的影响50-51
• 3.4 玉米高F值混合寡肽对小鼠生理功能的影响的的实验材料与仪器设备51-53
• 3.5 玉米高F值混合寡肽对小鼠生理功能的影响的的实验方法53-55
• 3.5.1 玉米高F值混合寡肽的制备53
• 3.5.2 玉米高F值寡肽灌胃前处理53
• 3.5.3 玉米高F值寡肽解醉酒生理功能研究53-54
• 3.5.4 玉米高F值寡肽抗疲劳生理功能研究54
• 3.5.5 实验数据处理54-55
• 3.6 玉米高F值混合寡肽对小鼠生理功能影响的结果与分析55-58
• 3.6.1 玉米高F值寡肽对醉酒时间、醉酒率、醒酒时间、死亡率的影响55
• 3.6.2 玉米高F值寡肽与对急性酒精中毒血清ALT、AST的影响55-56
• 3.6.3 玉米高F值寡肽对急性酒精中毒肝组织中MDA、SOD、CAT的影响56-57
• 3.6.4 玉米高F值寡肽对小鼠游泳时间、肝糖原、肌糖原、血尿素、血乳酸含量的影响57-58
• 3.7 结论58-59
• 第四章 凝胶层析法分离高F值混合寡肽及分离组分生理功能研究59-74
• 4.1 实验材料与仪器设备59-61
• 4.2 实验方法61-64
• 4.2.1 玉米高F值寡肽的制备61
• 4.2.2 最优初分离方法的选取61-62
• 4.2.3 SephadexG-15分离纯化条件优化及分离组分相对分子质量测定62-63
• 4.2.4 Sephadex G-15分离纯化得到的三种组分P1、P2、P3的解酒生理功能研究63
• 4.2.5 玉米高F值寡肽抗疲劳生理功能研究63-64
• 4.2.6 实验数据处理64
• 4.3 结果与分析64-73
• 4.3.1 高F值混合寡肽的凝胶过滤层析结果64-66
• 4.3.2 SephadexG-15凝胶过滤层析最优条件的确定及其相对分子质量的确定66
• 4.3.3 经Sephadex-G15分离得到的三个组分P1、P2、P3对醉酒时间、醉酒率、醒酒时间、死亡率的影响66-68
• 4.3.4 经Sephadex-G15分离得到的组分P1、P2、P3对急性酒精中毒血清ALT、AST的影响68-69
• 4.3.5 Sephadex-G15分离得到的组分P1、P2、P3对急性酒精中毒肝组织中MDA、SOD、CAT的影响69-71
• 4.3.6 经Sephadex-G15分离得到的组分P1、P2、P3对小鼠游泳时间、肝糖原、肌糖原、血尿素、血乳酸含量的影响71-73
• 4.4 结论73-74
• 第五章 高效液相色谱分离组分P3并研究其保肝护肝作用74-91
• 5.1 实验材料与仪器设备74-75
• 5.2 实验方法75-77
• 5.2.1 反相高效液相色谱分离纯化75
• 5.2.2 组分A和B对酒精引起肝脏病变过程中的作用的研究75-76
• 5.2.3 组分A和B对因酒精发生肝脏病变后的小鼠生理作用的研究76
• 5.2.4 实验数据处理76-77
• 5.3 结果与分析77-90
• 5.3.1 组分P3的高效液相色谱分析77
• 5.3.2 组分A和组分B对酒精引起肝脏损伤过程中体重指数、肝脏指数及死亡率影响77-80
• 5.3.3 组分A和组分B作用酒精引起肝脏损伤过程中血清ALT、GOT活性影响80-81
• 5.3.4 组分A和组分B酒精引起肝脏损伤血清T-CHO、HDL-C、TG和HA含量影响81-83
• 5.3.5 组分A和组分B对酒精引起肝损伤的小鼠肝脏的MDA含量及CAT、SOD活性的影响83-84
• 5.3.6 组分A和组分B对酒精造成肝损伤后小鼠体重、肝脏指数的影响84-86
• 5.3.7 组分A和组分B对酒精造成肝脏损伤后小鼠血清ALT、GOT活性影响86-87
• 5.3.8 组分A和组分B对酒精造成肝脏损伤后小鼠血清T-CHO、HDL-C、TG和HA含量影响87-88
• 5.3.9 组分A和组分B对酒精造成肝损伤后的小鼠肝脏的MDA含量及CAT、SOD活性的影响88-90
• 5.4 结论90-91
• 第六章 质谱分析91-95
• 6.1 实验材料与仪器设备91
• 6.2 实验方法91-92
• 6.2.1 收集反相高效液相色谱中的含量最高的组分91-92
• 6.3 结果与分析92-94
• 6.3.1 组分P的质谱分析结果92-94
• 6.4 结论94-95
• 第七章 结论与展望95-97
• 参考文献97-102
• 综述102-109
• 参考文献106-109
• 攻读学位期间取得的研究成果109-110
• 致谢110

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 王梅,谷文英,沈蓓英;活性碳色谱法分离制备高F值寡肽混合物[J];无锡轻工大学学报;1998年04期

  本文关键词：玉米高F值寡肽的制备及生理功能研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：282027