Tipranavir抗肝癌作用及其相关机制研究

发布时间：2020-10-09 21:47

　　研究背景肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上发病率较高的恶性肿瘤,严重威胁人们的健康和生命。全球不论在肝癌高发地区还是低发地区,HCC发病率男性高于女性2~8倍。在欧美,HCC的主要致病因素是慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染,而在亚洲和非洲则是慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染。目前HCC的治疗方法主要有外科治疗、消融技术、经动脉治疗、外电子束放疗、系统治疗以及系统治疗。由于手术治疗具有一定局限性,且辅助治疗的方法有限,因此,急需更有效的综合辅助治疗方法来提高患者预后,相对于传统的放化疗等辅助方法,分子靶向药物能有效地杀灭肿瘤细胞,疗效更好,且全身毒副作用较少,对HCC的治疗具有重要意义。沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regμLator 2 homolog 1,SIRT1)与酵母中发现的沉默信息调节因子Sir2基因家族同源,sirtuin家族由7个成员(SIRT1-7)组成,它们共享高度保守的催化核心结构域并依赖于NAD+的酶功能,家族成员的N-和C-末端延伸及其亚细胞定位不同,它们共同负责其各种结合配偶体以及不同的代谢功能,介导刺激诱导的细胞凋亡。SIRT1能使组蛋白和其他关键转录调节因子脱乙酰化,如p53,NF-κB,Foxo,Ku70,E2F1,PPARγ共激活因子1α和缺氧诱导的转录因子(HIF)。它对基因转录的广泛影响已经集中在细胞衰老,新陈代谢,炎症和应激反应等有关的细胞活动中。研究显示,SIRT1在HCC患者中异常高表达。由此,本实验室基于SIRT1展开抗肝癌活性研究。研究目的利用计算机辅助药物设计,本实验应用Sybyl2.1平台的Surflex-Dock模块研究Tipranavir和SIRT1晶体的对接研究,通过体外抗肝癌活性研究,初步确定Tipranavir对肝癌细胞HepG2具有一定的抑制作用,但是具体通过哪些细胞通路来抑制肝癌细胞的增殖还有待研究,因此本课题从此出发,将研究Tipranavir的作用机制,为Tipranavir治疗HCC提供一些思路。研究内容1.应用Sybyl2.1进行分子对接,配体为Tipranavir受体为SIRT1蛋白。2.Tipranavir体外抗肝癌活性研究,例如通过MTT法检测药物对于肝癌细胞HepG2的增殖的影响、LDH法检测细胞增殖、流式细胞术检测药物对肝癌细胞凋亡的影响、Hoechst染色法检测细胞凋亡、蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白。3.构建HepG2细胞SIRT1沉默细胞株及验证及siRNA沉默SIRT1基因对HepG2细胞凋亡及凋亡相关蛋白的的影响。4.Tipranavir对HepG2细胞作用的时间和剂量对SIRT1蛋白表达的影响。5.SIRT1过表达对HepG2细胞凋亡的影响及作用机制探讨。研究结果本课题通过Tipranavir体外抗肝癌活性研究初步证实Tipranavir对肝癌细胞HepG2具有一定的增殖抑制作用,并通过流式细胞仪检测药物Tipranavir会促进细胞凋亡,通过siRNA-SIRT1沉默HepG2初步证实药物可通过抑制SIRT1从而促进细胞凋亡,并通过相关促凋亡蛋白验证得出Tipranavir通过抑制SIRT1促进细胞凋亡。
【学位单位】：重庆理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R96
【部分图文】：

信号通路,放射疗法,靶点,生长因子受体

增殖性疾病以及衰老的许多潜在用途。目前发现与 HCC 有关的号通路包括血小板原性生长因子受体[20]、成纤维细胞生长因)[21]和血管内皮生长因子受体(VEGFR)[22]，这些信号通路共同介导增殖、存活、迁移和转移[23]，这些靶点的发现促成了治疗 HCC 的靶点或多靶点）的研发，如图 1.1 所示。表皮生长因子受体(EGFR供了合理的靶点[24]，因为它通常在多种实体瘤中过表达，并且其疗法和放射疗法的抗性以及不良预后相关。西妥昔单抗(C255)是FR 的特异性单克隆抗体，与化学疗法和放射疗法具有协同作用，已疗伊立替康难[25]治性结直肠癌(CRC)和头颈部鳞状细胞癌(SCCHN妥昔单抗[26]治疗非小细胞肺癌(NSCLC)，乳腺癌和胰腺癌的临床试，西妥昔单抗已被证明是一种治疗 EGFR 过度表达的新策略[27]。尽和进展与各种信号通路的错误传到有关，但其机制尚不确定[28]。20抗肿瘤制剂索拉菲尼(多吉美)同时被美国和欧盟批准用于治疗HC着晚期 HCC 的靶向治疗向前迈出了重要一步[29]。

去乙酰化,蛋白,信息调节,非组蛋白

重庆理工大学硕士学位论文的特定机制奠定了基础[45]。T1 的制剂剂信息调节因子 1)是哺乳动物 sirtuin 家族蛋白(S守的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)+依赖性脱乙存活[1]。SIRT1 在细胞活动过程中扮演者重要作非组蛋白，如图 1.2；SIRT1 在细胞生长、分化动中起到了重要作用，与众多基因的转录调控 SIRT1 在各种生物过程中的调节作用外，在 HCC要的是，SIRT1 被证实参与 HCC 的肿瘤发生、子的脱乙酰化。

生理活动

图 1.3 SIRT1 参与了多种生理活动Figure1.2 SIRT1 involved in a variety of physiological activities来，许多研究表明 SIRT1 与肿瘤的发生发展密切相关。研究显中 SIRT1 的含量明显增加[47]。基于 SIRT1 在癌症中高表达，肿瘤促进剂，并且大多数学者这么认为，也有人认为是肿瘤抑l 作为肿瘤的靶点不断深入研究，以及对 SIRTl 抑制剂的作用机IRT1 小分子抑制剂主要有 β-萘酚类、吲哚类、2-苯甲酰胺类、s、Tenovins、天然产物类等[48]。T1 的表达及调控T1 除自身的表达和活性受到精细的调控，同时也调控其转录水对 SIRT1 转录水平包括 p53 负性调节 SIRT1 转录、FOXO 家IRT1 转录、HIC1(Hypermethy in cancer1)负性调节 SIRT1 转录IRT1 转录[38]。

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