依达拉奉对谷氨酸诱发致伤PC12细胞的保护作用

发布时间：2020-10-17 12:56

　　 目的:依达拉奉是一种氧自由基清除剂,可抑制脂质过氧化作用,从而抑制血管内皮细胞、神经细胞的氧化应激损伤。谷氨酸(Glu)是脑组织内主要的兴奋性氨基酸,病理状态下可对神经元产生毒性作用。PC12细胞是大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤克隆化的细胞株,被广泛用于神经细胞生理功能的实验研究。因此,拟探明依达拉奉对Glu所致PC12细胞损伤的影响。方法:取对数增长期体外培养的PC12细胞分为6组,对照组只加入DMEM完全培养基,实验组Glu终浓度分别为2.5、5、10、20、40mmol/L,37℃,5%CO?条件下培养24h后MTT法检测PC12细胞存活率。选取细胞存活率降低为对照组50%~60%的Glu浓度为后续造模条件。将细胞接种24h后,造模同时分别加入20、40、60、80、100、120μmmol/L浓度的依达拉奉,对照组加入DMEM完全培养基,共设7个浓度组,选取40μmol/L,80μmol/L(峰效浓度)作为低、高浓度组为后续造模。取对数期细胞分为4组,Glu组细胞加入10mmol/LGlu,依达拉奉浓度组细胞中加入10mmol/LGlu后再分别加入40μmmol/L,80μmmol/L依达拉奉,对照组细胞加入等量DMEM,各组细胞加入药物后继续培养24h,以MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,共聚焦显微镜检测线粒体膜电位(MMP),活性氧簇(ROS),酶标仪比色法检测超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)。结果:1.MTT实验结果:Glu作用24h后,Control组细胞生长良好;与Control相比,升高Glu浓度,PC12细胞存活率依次降低。10 mmol/L Glu时,细胞存活率为对照组的52.40±4.67%。加入依达拉奉后,提高了PC12细胞的存活率,但仍低于对照组。80μmol/L依达拉奉时效果达峰值66.73±4.29%,继续增加依达拉奉浓度,细胞存活率反而相对下降。2.细胞凋亡的变化Glu作用24h后,与Control相比,其它三组PC12细胞的凋亡率显著增高,Glu+EDA1组和Glu+EDA2组细胞凋亡率较Glu组明显下降,Glu+EDA2组下降更为明显,差异有统计学意义(均P﹤0.05)。3.依达拉奉对PC12细胞内活性氧簇ROS的影响与Control组相比,加入Glu可明显升高PC12细胞内的ROS水平,在共聚焦显微镜下观察荧光强度最亮,细胞数目最多,Glu+EDA1组和Glu+EDA2组细胞ROS水平较Glu组下降,Glu+EDA2组较Glu+EDA1组下降更为明显,差异有统计学意义(均P﹤0.05)。4.依达拉奉对PC12细胞线粒体膜电位的影响与Control组相比,各药物组PC12细胞内线粒体膜电位显著下降,Glu+EDA1组和Glu+EDA2组细胞线粒体膜电位较Glu组明显上升,分别为0.73±0.06、0.93±0.07,Glu+EDA2组较Glu+EDA1组上升更为显著,差异有统计学意义(均P﹤0.05)。5.依达拉奉对PC12细胞SOD酶活性和MDA含量的影响与Control组相比,各药物组细胞内SOD酶活性显著降低,Glu+EDA1组与Glu组比较差异并不明显,无统计学意义;Glu+EDA2组较Glu下降明显。与对照组相比,各组MDA含量显著增加,Glu+EDA2组较Glu+EDA1组下降明显,差异有统计学意义。结论:1.依达拉奉对Glu诱导损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与依达拉奉拮抗Glu诱发的氧化应激有关。2.ROS介导的线粒体膜电位下降参与Glu诱发的神经细胞凋亡。
【学位单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R965
【部分图文】：

C12 细胞细胞存活率 n=6.＊＊P＜0.05 vs 对照组（GFig.1PC12 Cell Viability in 6 Groupsn = 6.＊＊P＜0.05 vs control group（Glu=0）

PC12 细胞细胞存活率 n=6.＊＊P＜0.05 vs 对照组（GluFig.1PC12 Cell Viability in 6 Groupsn = 6.＊＊P＜0.05 vs control group（Glu=0）

16A：Control 组 B：Glu 组 C:Glu+EDA1 组 D:Glu+EDA2 组图 3 流式细胞仪检测 4 组 PC12 细胞细胞凋亡Fig.3 The rate of apoptosis in four groups of PC12 cells was detected byflow cytometry
【参考文献】

相关期刊论文 前4条

1 崔玉环;张朝东;魏玉磊;;丁苯酞对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞线粒体损伤的保护作用[J];中国医科大学学报;2010年06期

2 ;Detection of apoptosis induced by new type gosling viral enteritis virus in vitro through fluorescein annexin V-FITC/PI double labeling[J];World Journal of Gastroenterology;2008年14期

3 秦涛余;陈志伟;;机体内活性氧生理功能研究进展[J];生命科学仪器;2008年02期

4 陈海燕,刘志婷,王鹏,吴雅晶;SOD GSH—PX CAT系列氧化清除酶活性监测对衰老进程的诊断意义[J];中国实验诊断学;2000年06期

本文编号：2844809