MEF2D导致索拉非尼对肝癌耐药的机制研究

发布时间：2020-10-31 00:59

　　 目的:索拉菲尼是肝癌靶向治疗的首选药物,但耐药性的产生限制其临床疗效。虽然目前对索拉菲尼的耐药研究有一定进展,然而其机制尚未完全阐明。通过在分子、细胞层面上阐明MEF2D促进索拉非尼耐药的分子机制,确定MEF2D通过SPRY4/RAS/ERK通路影响肝癌的索拉非尼疗效。方法:首先,通过间歇诱导法建立索拉非尼肝癌耐药株,通过显微镜观察细胞形态变化;MTT法检测耐药株的耐药指数。Western Blot检测索拉非尼耐药株与敏感株中MEK、p-MEK、ERK、p-ERK、MEF2D的蛋白表达量的差异;为了探索MEF2D索拉非尼耐药中的角色,先在肝癌的索拉非尼耐药株中沉默MEF2D或者在肝癌的索拉非尼敏感株中过表达MEF2D,然后通过CCK-8细胞增殖实验评价肝癌细胞对索拉非尼敏感性的变化;通过实时荧光定量PCR和Western Blot分别检测肝癌细胞中SPRY4 m RNA和蛋白水平的变化。结果:通过倒置显微镜以及MTT结果显示,索拉非尼耐药株建成;MEF2D、p-MEK、p-ERK的蛋白表达量在索拉非尼耐药株中的表达量明显高于索拉非尼敏感株;在耐药株中沉默MEF2D,肝癌耐药株p-ERK和p-MEK表达下降,导致耐药株对索拉非尼的耐药性降低;而在敏感株细胞中过表达MEF2D后,肝癌细胞p-ERK和p-MEK表达上升,同时细胞对索拉非尼的耐药性随之升高。另外,经相同的实验处理之后,RAS/ERK通路的负调控因子SPRY4的m RNA和蛋白水平变化趋势与MEF2D相反。结论:MEF2D通过抑制SPRY4的表达,使ERK通路的活性增强,促进了索拉非尼耐药性的产生。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R96
【部分图文】：

实验结果实验结果药的肝癌细胞株的建立 检测肝癌细胞的生存率，如图 1 所示，随着药物浓低。通过 SPSS 软件计算得出，48h 后 PLC/PRF/5M，Huh7 的 IC50值为（11.28±0.02）μM。在筛选成非尼耐药株的细胞形态变化，并对索拉非尼敏感组（图 2）。如图 3 所示利用 CCK8 检测索拉非尼耐非尼敏感组，并且具有差异性（p<0.05）。耐药株M，耐药指数为 3。实验结果证明 PLC/PRF/5 的索PLC/PRF/5

A B图 2 倒置显微镜观察 PLC/PRF/5（a）及其耐药细胞(b)的形态学变化(X40)。利用倒置显微镜摄 PLC/PRF/5 细胞以及经索拉非尼处理后的 PLC/PRF/5-DR3 细胞，观察细胞的形态变化PLC/PRF/5-DR3

12 3 CCK8 法检测索拉非尼对 PLC/PRF/5-DR3 细胞增殖抑制作用。在 PLC/P拉非尼（0，2，4，8，16，32μM）分别处理 48h 后，用 CCK8 实验检测吸用 SPSS 软件分析 PLC/PRF/5-DR3 细胞的 IC50值。
【参考文献】

相关期刊论文 前5条

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本文编号：2863244