毛杭子梢抗H5N1病毒活性成分研究
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【摘要】:自1997年首次报道人类感染H5N1禽流感病毒以来,据WHO统计,截止至2014年7月,人感染H5N1禽流感将近700人,且死亡率高达60%。由于其变异性和耐药性,目前尚未有相应的高效药物用于临床。因天然产物结构具有新颖性,从中草药中寻找有抗病毒活性的化合物,日趋受到重视。课题组前期以80多种中草药作为筛选对象,筛选出几种具一定抗H5N1病毒活性的中草药。根据活性的强弱,本课题选取了毛杭子梢作为研究对象,对其活性部60%醇提物的乙酸乙酯萃取部位进行系统研究。毛杭子梢(Campylotropis hirtella(Franch.)Schindl),俗称大和红、锈钉子、油根、扁皂角,为豆科植物杭子梢属植物,以根入药,其药材又名大红袍(Radix Campylotropis hirtella(Franch.)Schindl)。广泛分布于我国云南、贵州和四川等省,具有调经活血,止痛,收敛的功效。用于闭经,痛经,白带,胃痛;外用治黄水疮,烧烫伤,根研粉外用于止血;以及胃和十二指肠溃疡《民族药志三》。其化学成分主要有木脂素、香豆素类、黄酮类、鞣质等。利用重结晶、硅胶柱色谱、ODS、Sephadex LH 20等色谱技术对毛杭子梢根60%乙醇提取物进行系统分离纯化,共得到29个单体化合物,并通过理化性质和波谱数据,鉴定了其中25个化合物的结构,分别为:红花岩黄芪香豆雌酚I(1),4′,6′,7三羟基2′甲氧基3苯基香豆素(2),红花岩黄芪香豆雌酚B(3),isotrifoliol(4),槲皮素(5),山奈酚(6),二氢山奈酚(7),(2R,3S)3′,4′,3,5,7五羟基黄烷(8),伞形花内酯(9),秦皮甲素(10),薯蓣皂苷元(11),芦丁(12),槐角苷(13),大豆黄素(14),香豌豆酚(15),阿魏酸(16),麦芽酚(17),水杨酸(18),1,3二羟基蒽醌(19),(2R,3R)3,4′二羟基7甲氧基8甲基黄烷(20),胡萝卜苷(21),β谷甾醇(22),(2R)4′,7二羟基黄烷(23),3,4二羟基苯甲酸(24),4羟基苯甲酸(25)。其中化合物1和2为新化合物;化合物3、4、10、13、15、19、20、23为首次从该属中分离得到。以H5N1病毒感染MDCK细胞为筛选模型,采用细胞病变效应观察法(CPE法)对毛杭子梢根总提物和各部位萃取物以及得到的单体化合物进行抗H5N1病毒活性评价。结果显示,毛杭子梢根总提物对H5N1病毒在150 g/m L水平有一定的抑制活性,乙酸乙酯部位和正丁醇部位表现出比总提物有更好的抑制病毒活性。在单体化合物体外活性筛选结果中,化合物15浓度在50.0 g/m L水平CPE结果为“++”,表明化合物M在细胞水平上对H5N1有一定的抑制活性。化合物14浓度在200 g/m L水平上CPE结果为“++”,且呈剂量依赖关系。
【关键词】:毛杭子梢 大红袍 化学成分 H5N1病毒
【学位授予单位】:中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R914
【目录】:
- 缩略语索引4-5
- 中文摘要5-7
- 英文摘要7-9
- 1 前言9-12
- 1.1 禽流感病毒概况9-10
- 1.2 药物预防与治疗10-11
- 1.3 研究内容11-12
- 2 毛杭子梢的化学成分研究12-44
- 2.1 分离得到的化合物名称与结构12-35
- 2.1.1 新化合物的结构鉴定17-21
- 2.1.2 已知化合物的结构鉴定21-35
- 2.2 实验部分35-44
- 2.2.1 实验仪器、试剂与药材35
- 2.2.2 提取与分离35-39
- 2.2.3 化合物的结构鉴定数据39-44
- 3 抗H5N1病毒活性研究44-48
- 3.1 实验仪器及试药44
- 3.2 实验方法44-46
- 3.2.1 试药的配制44
- 3.2.2 细胞模型的建立44-45
- 3.2.3 活性筛选实验方法45-46
- 3.3 筛选结果46-48
- 3.3.1 抗H5N1病毒活性筛选结果46
- 3.3.2 单体化合物活性筛选结果46-48
- 4 结论48-50
- 参考文献50-52
- 图谱52-83
- 综述83-89
- 参考文献88-89
- 个人简历89-90
- 致谢90
【参考文献】
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