来源于多形拟杆菌的乙酰酯酶BT4096晶体结构解析

发布时间：2021-01-06 03:07

　　地尔硫卓是一种非二氢吡啶类钙离子拮抗剂,作为临床药物具有高选择性、高耐受性、广适用性等特点,目前已广泛用于治疗高血压、心绞痛以及心律失常等心血管疾病。地尔硫卓在体内代谢可生成多种代谢产物,这些代谢产物多具有药物活性,对钙离子通道有着不同的抑制作用。地尔硫卓及其代谢物在体内的脱乙酰作用依赖于一种来源于肠道微生物多形拟杆菌的乙酰酯酶BT4096（GenBank,NP₈13007.1）。本实验以BT4096蛋白为研究对象,对其进行表达、纯化及晶体结构解析。BT4096截去其N端信号肽后有440个氨基酸,分子量为51 kDa,全基因合成并构建在pET32a载体上,后转入工程菌株BL21（DE3）中进行表达。通过两次镍亲和层析纯化,获得了符合结晶纯度的BT4096蛋白溶液。晶体条件的初筛通过微量蒸汽扩散-坐滴法,使用商业化结晶试剂盒对晶体条件进行筛选。晶体衍射数据的收集在同步辐射中心进行。利用单波长反常散射的方法解析了BT4096的相位,通过PHENIX搭建初始结构模型,使用COOT进行结构修正,最终获得分辨率为2.33 A的结构。BT4096的结构可分为两个部分,N端结构... 

【文章来源】：中国科学技术大学安徽省 211工程院校 985工程院校

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【学位级别】：硕士

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图１．２?ＳＧＮＨ家族水解薄（ＧＤＳＬ家族）催化机制??注：催化三联体和水分子用黑色表示，氧阴离子洞为蓝色，底物为红色??

?第３章结果与讨论???第３章结果与讨论??３．１?ＢＴ４０９６生物信息学预测??（１）?ＢＴ４０９６信号肽预测??用在线软件ＳｉｇｎａｌＰ５．０对ＢＴ４０９６氨基酸序列进行分析，结果如图３．１。序??列ＡＦＡ－ＱＴ间有信号肽切点，重组蛋白的表达需除去信号肽部分，在基因合成时??截去Ｎ端２０个氨基酸。??Ｓｉ＾ｎａｌＰ－５．０?ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ?（Ｅｕｋａｒｙａ）：?Ｓｅｑｕｅｎｃｅ??ｉ?ｊ＂?＇＇?????＂?ＳＰ（Ｓｅｃ／ＳＰＩ）???Ｊ?ｉ?ＯＴＨＥＲ??０．８－?ｐ??安?ｉ??『?！??：?ａ?＾??ｏ－?－一????ｗ?????—??－?■?■?—＇?■＇?????ＮＫＫＦＬＶＬＶＡＡＶＣＭＡｙＴＴＡＰＡＱＴＶＫＰＦＫＥ６ＤＲＡＶＦＬＧＮＳｌＴ〇６ＧＲｙＨ￥ＦＺＭＬＹＹｎＴＲＦＰＮＭＰＩＲＶＦＮＧＧＩＧ??ｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｃｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘ??Ｉ?１?Ｉ?１?Ｉ?１?Ｉ?＇??０?２０?４０?６０??Ｐｒｏｉｒｉｎ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ??图３．１?ＢＴ４０９６信号肽预测??（２）?ＢＴ４０９６跨膜区预测??用在线软件ＴＭＨＭＭ?２．０对ＢＴ４０９６氨基酸序列进行分析，结果如图３．２所??示，ＢＴ４０９６不含跨膜螺旋。??ＴＭＨＭＭ?ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ?ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｉｅｓ?ｆｏｒ?ＷＥＢＳＥＱＵＥＮＣＥ??１．２????■???■???????????１?？?ｉ?＊??Ｉ??

图３．２?ＴＭＨＭＭ跨膜预测??


本文编号：2959817